[发明专利]一套用于炭疽杆菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于炭疽杆菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒。具体地本发明中公开了可用作炭疽杆菌实时荧光PCR检测标准分子的多核苷酸和DNA构建物PA和capA。本发明的质粒标准分子解决了炭疽杆菌实时荧光PCR检测中标准物质缺乏的难题，保证炭疽杆菌实时荧光PCR方法检测结果的可比性，为炭疽杆菌实时荧光PCR方法检测提供了可靠质量控制方法。

技术领域

本发明涉及一套生物工程技术领域的质粒分子，具体涉及一套用于炭疽杆菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒。

背景技术

炭疽杆菌(Bacillus anthraci)归属于芽胞杆菌属(Bacillus)。炭疽杆菌能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。平时，牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染，故已引起世界多国相关部门的重视。

目前炭疽杆菌的检测方法分为两类,一类是传统的培养及其改进方法，依赖于生化与形态学特点，检测周期较长，可操作性差；一类是聚合酶链式反应(polymerase chainreaction，PCR)相关方法，包括普通PCR方法以及实时荧光PCR方法，主要是针对炭疽杆菌区别于芽胞杆菌属其它细菌的多个靶基因，选择特异序列，建立PCR以及实时荧光PCR方法。炭疽杆菌PCR相关检测方法近年来发展迅速，由于其快速、灵敏、特异的特性，已经成为食源性病原微生物的可靠检测方法。

质粒DNA标准物质是一种含有检测目的基因的特异性片段的重组质粒分子，在PCR定性检测中可以作为阳性对照，在PCR定量分析中可以作为定量分析的标准品，构建定量分析的标准曲线。目前质粒DNA分子作为基因检测的标准物质得到了越来越多的深入研究和应用，但是针对炭疽杆菌实时荧光PCR检测方法的质粒DNA标准物质还是空白。在实际炭疽杆菌实时荧光PCR时，各单位使用的多是自行设计构建的质粒DNA分子作为标准品，其中的目的基因特异性片段各不相同，同时缺乏统一的定值方法，质粒DNA分子定值准确度差，造成各实验室之间的检测结果差异极大，缺乏可比性。

发明内容

本发明的目的在于提供一套适用于炭疽杆菌实时荧光定量PCR检测的质粒标准分子及其应用。

本发明的第一方面，提供了一套分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含炭疽杆菌的大分子毒素基因PA基因序列和/或炭疽杆菌的大分子荚膜基因capA基因序列。

在另一优选例中，所述炭疽杆菌大分子毒素基因PA的基因序列选自下组：

(a)序列如SEQ ID NO.:3所示的多核苷酸序列；

(b)核苷酸序列与SEQ ID NO.:3所示序列的同源性≥95％(较佳地≥98％)的多核苷酸序列；

(c)序列与SEQ ID NO.:3所示多核苷酸完全匹配或完全互补并且长度为SEQ IDNO.:3所示序列长度的20％-100％(较佳地50％-100％，更佳地80％-100％，最佳地90％-100％，如95％)的多核苷酸序列；

(d)与(a)-(c)任一所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸序列。

在另一优选例中，所述炭疽杆菌的大分子荚膜基因capA基因序列选自下组：

(a)序列如SEQ ID NO.:1所示的多核苷酸序列；

(b)核苷酸序列与SEQ ID NO.:1所示序列的同源性≥95％(较佳地≥98％)的多核苷酸序列；

(c)序列与SEQ ID NO.:1所示多核苷酸完全匹配或完全互补并且长度为SEQ IDNO.:1所示序列长度的20％-100％(较佳地50％-100％，更佳地80％-100％，最佳地90％-100％，如95％)的多核苷酸序列；

(d)与(a)-(c)任一所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸序列。