[发明专利]一种荧光定量的测量方法

说明书

本发明属于化学测量技术领域，公开了一种荧光定量的测量方法，本发明所述荧光定量的测量方法在同样的条件下，分别测量反应液所产生的荧光强度F₀和待测样品液与反应液混合后所产生的荧光强度F；由反应液所产生的荧光强度F₀和待测样品液所产生的荧光强度F计算出待测样品液真实浓度c，其中F/F₀＝Kc，K为荧光系数。本发明所述荧光定量的测量方法中所述反应液所产生的荧光强度F₀的测量和待测样品液与反应液混合后所产生的荧光强度F的测量均在同样的环境中进行，可以减少光源衰减与环境温度的影响，同时无需设立空白样或对照样。而且本发明所述测量方法操作简单，样本不需要进行任何处理，对仪器的要求低，简易的荧光仪即可完成测量。

技术领域

本发明属于化学测量技术领域，具体涉及一种荧光定量的测量方法，尤其是涉及一种降低光源衰减与环境温度的影响的荧光定量的测量方法。

背景技术

POCT，即时检验(point-of-care testing)，指在病人旁边进行的临床检测，通常不一定是临床检验师来进行，是在采样现场即刻进行分析，省去标本在实验室检验时的复杂处理程序，快速得到检验结果的一类新方法。尽管POCT的提法在90年代才开始出现，实际上在70年代，随着重症监护医学的发展，对于POCT的需求就出现了。止凝血检验中，临床医生对快速报告与结果可靠的要求非常迫切，急诊或者围手术期出血时，实验室的平均周转时间(TAT)大约在45-90min，一般标准化实验室的时间大约比POCT长1.5h。POCT和实验室检测凝血机能时，标本处理和准备方式是有明显差别的。POCT操作简便而且能够快速检出结果，因此，这种需求为POCT在止凝血检验中的应用打开了大门。POCT测定不需要血样送检，无需等待报告，可以很快给患者调整用药剂量。POCT节省的时间可以产生一些无形价值，特别是在监护室和手术室中，手术时间的长短，处置的多少，时间往往意味着节约就医成本，而且在止血血栓检验中还能减少不必要的输血，优势明显

荧光定量测试是POCT中最常用的一种测量方法。其中一种荧光定量测量方法是直接以绝对荧光强度进行换算，其理论依据为荧光强度I正比于吸收的光量I_α和荧光量子效率

由朗-比耳定量：I_α＝I₀(1-10^-εbc)

浓度很低时(εbc≤0.05)，将括号近似处理后：

K为荧光系数(与物质性质、激发波长、发射波长、溶剂、温度有关)，ε为待测样品的摩尔吸光系数，b为液槽厚度。

从上述公式中可知，荧光强度与物质浓度呈正比关系，但前提是除了浓度低外，也需要保证I₀(激发光强度)是固定的，即每次的激发光的强度是一致的。但是，实际的检测仪，尤其是POCT类的产品，很难保证光源不发生衰减，当光源衰减时，测试就会出现明显偏差。因此，在实际的产品应用中，直接以绝对荧光强度与浓度建立的标准曲线，测试结果不可靠。

因此，在利用荧光定量测试时，为了提高结果的准确性，会使用到另外一种标准曲线的建立方法，以先测试空白溶液的荧光值，以绝对荧光值扣除空白值(差值)，以差值与浓度建立标准方程，但是该方法虽然一定程度上，减少了光源衰减的影响，但是需要每次测试时，测试空白样本的荧光值，明显增加成本和使用者的工作量，这在实际的POCT产品中并不易实现。

另一种荧光定量测量的方法称为比较法，取已知量的荧光物质配成一标准溶液，测定其荧光强度。然后在同样条件下测定试样溶液的荧光强度，由标准溶液的浓度和两个溶液的荧光强度的比值求得试样中荧光物质的含量。由于标准样本与试样均在同样条件下进行测试，所以光源衰减与环境温度的影响可以减少，但是，每次测试时，均需要进行标准溶液的测定，因此同样在POCT产品中不易实现。