[发明专利]一种用于通关藤的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于中药检测的技术领域，具体的涉及一种用于通关藤的检测方法。

背景技术

通关藤为萝藦科植物，又名乌骨藤等，始载于《滇南本草》，药材标准收载于1974年版《云南省药品标准》、1977年版《中国药典》及2010年版《中国药典》。目前检测通关藤的方法主要包括性状鉴定、显微鉴定、薄层鉴定、理化鉴定及含量测定等方法。含量测定主要通过分光光度法或者如《通关藤药材及制剂指纹图谱的建立方法及应用》(专利申请号CN201410119474.8)一文中采用HPLC-ELSD法测定通关藤中甾体皂苷含量，还有《通关藤药材及制剂指纹图谱的建立方法及应用》(专利申请号CN201310684459.3)提到的采用HPLC-ELSD法测定通关藤中酚酸类含量。

专利《一种乌骨藤皂苷的检测方法》(专利申请号CN201110232427.0)认为：“乌骨藤皂苷在紫外光区没有显著的特征吸收，因此很难对其中化学成分含量进行精密准确的测定”，“选用紫外检测器，由于乌骨藤皂苷在紫外光区无特征吸收，因此选用该方法检测必定会有专属性差、误差大的缺点。”

由上述可知现有技术中所存在的缺陷如下：

1、现有技术中仅仅是通过单一的某成分，如绿原酸或通关藤苷H中的一个单一成分为指标来鉴别和控制通关藤含量，这样对于通关藤含量的测定准确性、稳定性以及灵敏度均不能达到最佳的效果，从而不能很好控制药材及制剂的质量；

2、现有技术认为采用HPLC-UV检测通关藤苷H存在专属性差，误差大的缺陷，因而均不采用HPLC-UV的检测方法，而是选用灵敏度与检测限度远小于HPLC-UV的HPLC-ELSD方法进行检测；

3、现有技术检测的对象为药材或者制剂，尚未有一种检测方法均适用于药材、水提取物和制剂中通关藤含量的检测。

发明内容

本发明的目的在于针对上述存在的缺陷而提供一种用于通关藤的检测方法，该检测方法对通关藤中绿原酸、通关藤苷H同时进行鉴别，同时检测出两种成分的含量，并建立以绿原酸、通关藤苷H为参照物的特征指纹图谱，可以同时应用于药材、水提取物、消癌平制剂，稳定性好，易操作，一次性检测两种成分，专属性强，节约检测时间，大大提高检测精准度和灵敏度。

本发明的技术方案为：一种用于通关藤的检测方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液、对照品溶液与对照药材溶液的制备：分别制备供试品溶液、2～6mg/ml绿原酸对照品溶液、0.1～0.5mg/ml通关藤苷H对照品溶液和通关藤对照药材溶液；

(2)绿原酸、通关藤苷H的鉴别：分别取供试品溶液、绿原酸对照品溶液、通关藤苷H对照品溶液、通关藤对照药材溶液10ul，点于同一硅胶G薄层板，然后配制展开剂，取展开剂的上层溶液置于薄层板上；静置待上层溶液展开，将薄层板取出并晾干；待薄层板晾干后将薄层板置于紫外光灯下，在波长365nm的条件下进行检视，首先供试品溶液的色谱分别与绿原酸对照品溶液、通关藤对照药材溶液的色谱在相应位置上显相同颜色的荧光斑点或主斑点；然后利用质量浓度为5％的硫酸香草醛试液显色，加热至斑点清晰，供试品溶液的色谱分别与通关藤苷H对照品溶液、通关藤对照药材溶液的色谱在相应位置上显相同颜色的斑点或主斑点；

(3)绿原酸、通关藤苷H的含量检测：取供试品溶液、绿原酸对照品溶液和通关藤苷H对照品溶液采用HPLC-UV进行检测；其中流动相为乙腈和0.5％磷酸水溶液，检测波长为190～220nm；

(4)建立以绿原酸、通关藤苷H为参照物的特征指纹图谱。

所述步骤(2)中的展开剂由乙酸丁酯、甲酸和水组成。

所述乙酸丁酯：甲酸：水的体积比为14:5:5。

所述步骤(3)中的检测波长为201nm。

所述步骤(3)中采用的HPLC-UV填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。

所述步骤(3)中采用流动相梯度洗脱，其中梯度改变流动相比例的时间点以及该时间点设定的乙腈与0.5％磷酸水溶液的体积比如下：0min时，乙腈与0.5％磷酸水溶液的体积比为15:85；5min时，乙腈与0.5％磷酸水溶液的体积比为8:92；50min时，乙腈与0.5％磷酸水溶液的体积比为80:20；55min时，乙腈与0.5％磷酸水溶液的体积比为15:85；60min时，乙腈与0.5％磷酸水溶液的体积比为15:85。

所述检测方法应用于通关藤药材、通关藤水提取物和消癌平制剂。