[发明专利]维生素B5的偶联物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种VB₅的偶联物，由（R）-N-3，3-二甲基-2，4-二羟基-1-氧代丁基）-3-丙氨酸钙盐（VB₅）半抗原与产生免疫原性的载体物质偶联而成，所述载体物质为优选蛋白质，蛋白片段，合成多肽或半合成多肽。

2.由权利要求1所述的VB₅的偶联物，其中所述蛋白质是钥匙孔蓝蛋白。

3.如权利要求2所述的VB₅的偶联物，其结构通式如（）

()

其中，n为与一个钥匙孔蓝蛋白结合的维生素B₅的分子个数，所述n为整数1~20，KLH为钥匙孔蓝蛋白（KeyholeLimpetHemocyanin),分子量范围是450KDa~1300KDa；

上述偶联物显示出如下物化特征：

外观：白色粉末固体。

4.如权利要求3所述的VB₅的偶联物，其特征是：所述n为整数5~15，KLH分子量范围是450KDa~1300KDa。

5.权利要求1~4中任一项所述的VB₅的偶联物的制备方法，其特征是：将VB₅与产生免疫原性的载体物质连接起来，结合为具有诱发动物免疫系统产生抗体的偶联物，并保持该偶联物的生物活性不变。

6.如权利要求5所述的VB₅的偶联物的制备方法，由如下步骤完成：

溶液A的制备：在冰浴中，将维生素B₅溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF)中，全溶解后向其中滴加三正丁胺，搅拌0.5h，再滴加入氯甲酸异丁酯，反应1h；

溶液B的制备：将KLH溶于pH为7.38~7.56，浓度为0.01M~0.02M的磷酸缓冲溶液中，配成5mg/ml的溶液，备用；

分别取溶液A和溶液B，在4℃温度下，把溶液A逐滴加入到不断搅拌状态下的溶液B中，反应过夜，得溶液C；

溶液C用上述磷酸缓冲液搅拌透析70~80小时，再改用蒸馏水透析20~30小时，每6h更换一次透析液；

冻干透析液，得到白色维生素B₅的偶联物。

7.如权利要求6所述的VB₅的偶联物的制备方法，其特征是：步骤（1）所述VB₅与三正丁胺、氯甲酸异丁酯摩尔比为1：1.1：1.4。

8.如权利要求6所述的维生素B₅的偶联物的制备方法，其特征是：步骤（3）所述的维生素B₅与钥匙孔蓝蛋白的质量数比为1：1。

9.权利要求1~4中任一项所述的维生素B₅的偶联物作为免疫原在制备维生素B₅特异反应抗体中的应用。