[发明专利]一种将间充质干细胞转化为睾酮分泌细胞的诱导剂及诱导培养基

说明书

本发明属于干细胞诱导分化技术领域，具体涉及间充质干细胞的定向分化诱导剂及培养基。一种将间充质干细胞转化为睾酮分泌细胞的诱导剂，含有阿司匹林、地塞米松、孕酮、白藜芦醇、胰岛素、甲状旁腺激素、维生素C、半胱氨酸。本发明的诱导培养基，以人间充质干细胞无血清培养基为基质，每1000ml诱导培养基中含有：阿司匹林1～2mmol、地塞米松0.1～0.3μmol、孕酮2～3μg、白藜芦醇30～50μmol、胰岛素10～30mg、甲状旁腺激素0.5～1.5nmol、维生素C 2～4mmol、半胱氨酸0.4～0.8mmol，余量为人间充质干细胞无血清培养基。本发明的将间充质干细胞转化为睾酮分泌细胞的诱导剂及诱导培养基诱导分化效率高；诱导后细胞活性强，可诱导间充质干细胞转化为睾酮分泌细胞，安全性高。

技术领域

本发明属于干细胞诱导分化技术领域，具体涉及一种间充质干细胞定向分化诱导剂及培养基。

背景技术

睾酮又称睾丸素、 睾丸酮或睾甾酮，是一种类固醇荷尔蒙，由男性的睾丸间质细胞（Leydig细胞）或女性的卵巢分泌，肾上腺亦分泌少量睾酮，Leydig细胞分泌了男性睾酮总量的95%，睾酮在体内具有维持肌肉强度及质量、维持骨质密度及强度、提神及提升体能等作用。在胎儿出生后11天左右，睾丸中Leydig细胞从其干细胞（stem Leydig cells，SLCs）分化为成年型Leydig细胞，此时，在睾丸间质区可以检测到3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）的表达。3β-HSD是类固醇激素合成酶之一，也是Leydig细胞的标准物。

人类睾丸间质细胞功能下降时，睾酮分泌不足，造成成年男性性功能障碍、性欲减退、乏力、容易失眠、记忆力下降等。目前，对于人类睾丸间质细胞功能下降，有三种治疗方法：1、传统的雄激素替代疗法：存在一些缺点，如服用不便，患者难以长期坚持规律服用；药物作用时间短；血液中雄激素水平波动大，尤其是对于大多数的青少年病人；肝肾毒性大，被迫中断的病人多等。2、睾丸移植术：能在一定程度上能解决男性无睾症、小睾丸和性功能障碍等疾病，但睾丸是性器官，是能产生精子的器官，产生伦理学问题。3、睾丸间质细胞移植：虽能避免产生精子，基本上不受伦理学的限制，但是来源太少，提取及培养困难，临床应用受限。

随干细胞的研究与发展，人们都把目光转移到了干细胞上。间充质干细胞（MSC）是一种具有多向分化潜能的干细胞，在胚胎发育中来源于中胚层，在胚胎发育中期开始出现，之后几乎分布于机体的所有器官与组织中。成体MSC主要存在于骨髓，脂肪，骨膜下以及各个器官和组织中的血管周围。MSC具有分化为多种中胚层细胞系的潜能，包括成骨细胞，脂肪细胞，软骨细胞，基质细胞，成纤维细胞，肌腱细胞等。在机体正常的损伤修复过程中，MSC可以在趋化因子的诱导下，招募至损伤部位，在局部增殖、分化，并通过旁分泌作用参与损伤修复与组织再生。MSC来源广泛且没有伦理限制，易于分离和体外扩增，在经过多次分裂传代后仍保持多向分化潜能，至今为止的临床试验研究未发现MSCs有严重副作用，因此，MSC是一种非常理想的细胞治疗和再生医学的种子细胞。

目前，骨髓、脐带、胎盘、脂肪、羊膜等等都含有丰富的MSC。其中，脐带间充质干细胞来源广泛，无伦理问题，易于采集存储。而脂肪干细胞作为间充质干细胞的一种，是一种多能前体细胞，在体外可以被诱导向成骨，成软骨，成脂肪细胞分化。脂肪MSC不但来源广泛，容易取材，而且不存在伦理学问题和免疫排斥反应等问题，自体干细胞移植治疗睾丸间质细胞功能下降逐渐被人接受。