[发明专利]一种利用微波固相合成法合成药物多肽那法瑞林的方法

说明书

本发明涉及一种利用微波固相合成法合成药物多肽那法瑞林的方法。按照固相合成的方法利用微波反应仪依次连接具有Fmoc保护的氨基酸，获的保护的十肽树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团，用DIC/HOBt或DIC/HOAt或BOP/HOBt或BOP/HOAt或HBTU/HOBt或HBTU/HOAt或HATU/HOBt或HATU/HOAt或HCTU/HOBt其中的一种为缩合剂进行接肽反应，得到保护的十肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得那法瑞林粗品，并经C18色谱柱进行分离纯化，获得所述的那法瑞林，然后可再经过冷冻干燥，获得那法瑞林醋酸盐或三氟乙酸盐产品。

技术领域

本发明涉及一种多肽的固相合成法，特别涉及到一种合成那法瑞林的方法。

背景技术

那法瑞林又名醋酸那法瑞林技术主要应用是为促性腺激素释放激素(GnRH)的类似物。用于治疗子宫内膜异位症，可消除疼痛、减轻子宫内膜损伤。目前的常规那法瑞林生产工艺中想要充分耦合一个氨基酸到树脂上时往往需要1个小时到2个小时不等.脱除fmoc保护基时一般需要20分钟到40分钟.从上述时间数据上我们出来，用常规方法制作时间太长，也因此造成了该药品的价格居高不下。

发明内容

针对上述技术缺陷，本专利解决的技术问题是：解决目前那法瑞林生产工艺的不便捷及普通固相反应法和液相反应法收率较低，反应效率较低的问题。实现充分耦合一个氨基酸到树脂上只需3分钟，脱除fmoc保护基时只需要1分钟左右的目的。

为完成上述发明目的，本发明是这样实现的：以Fmoc-Linker-AM-Resin或Fmoc-Linker-MBHA-Resin为起始原料，按照固相合成的方法利用微波反应仪依次连接具有Fmoc保护的氨基酸，获的保护的十肽树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团，用DIC/HOBt或DIC/HOAt或BOP/HOBt或BOP/HOAt或HBTU/HOBt或HBTU/HOAt或HATU/HOBt或HATU/HOAt或HCTU/HOBt其中的一种为缩合剂进行接肽反应，得到保护的十肽树脂后，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得那法瑞林粗品，并经C18色谱柱进行分离纯化，获得所说的那法瑞林，然后可再经过冷冻干燥，获得那法瑞林醋酸盐或三氟乙酸盐产品。

本专利所利用的微波合成的方法，每接入一个氨基酸所耗费的时间比传统方法缩短了10倍。合成一条10个氨基酸的多肽只需2.5小时。传统的方法需要数小时甚至数天才能在肽链加入一个氨基酸。同时微波也有效的提高了去保护，耦合及切割过程的反应率。 从树脂上切割多肽只需要10－15分钟。 在2－3分钟内，微波就可以辅助完成70％—80％的去保护及耦合反应。

具体包括以下步骤，

选用Fmoc-Linker-AM-Resin或Fmoc-Linker-MBHA-Resin为原料与DCM混合真空泵抽干，加入脱帽试剂，用真空泵抽干，重新加入脱帽剂利用微波反应3分钟( 30℃—40℃)，用真空泵抽干，用DMF洗涤3次，无水甲醇洗涤3次，重蒸过的DCM洗涤3次，加入Fmoc-Gly-OH、HOBt、分析级的DMF、DIC利用微波反应5分钟抽干，用工业级的DMF洗涤3次，无水甲醇洗涤3次，重蒸过的DCM洗涤3次，抽干;

b、制备Fmoc-Pro -Gly-Linker AM Resin

在步骤1的Fmoc-Gly-Linker AM Resin树脂中，加入脱帽试剂，利用微波30～60℃反应2分钟，抽干，重新加入脱帽剂30～60℃微波反应3分钟，抽干，洗涤，加入Fmoc-Pro-OH、HOBt分析级的DMF、DIC微波反应5分钟，抽干，洗涤，抽干，获得Fmoc- Pro-Gly-Linker AMResin；

c、制备Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker AM Resin

按第二步工艺，加入Fmoc-Arg(Pbf)-OH、HOBt；