[发明专利]自然酶活性脂蛋白相关磷脂酶A2及制备过程

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脂蛋白相关磷脂酶A2（Lipoprotein-associatedphospholipaseA2，LP-PLA2）是磷脂酶家族中PLA2的一种，有441个氨基酸残基的分泌蛋白（45KDa），以酶活性形式循环在血液中。LP-PLA2是丝氨酸依赖的磷脂酶,其催化活性不需要钙离子。LP-PLA2酶活性区域位于蛋白C端，S273，D296，H351氨基酸残基组成酶催化活性核心位点；189-239氨基酸残基形成片成结构，参与控制酶底物的特异性，并为低密度脂蛋白（LDL）结合区域；367-370氨基酸残基参与高密度脂蛋白（HDL）结合。

血液中LP-PLA2来源有两类，一是由单核细胞、淋巴细胞以及肥大细胞产生和分泌到血液中；另一来源是由处于活动状态动脉血管硬化灶中的单核细胞，吞噬细胞产生并分泌到血液中，其分泌量与动脉血管硬化灶活动程度相关。血液中LP-PLA2与LDL和HDL相关，其中80%LP-PLA2与氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）结合，10-20%LP-PLA2与DHL结合。LP-PLA2磷脂酶能水解磷酯sn-2位短酯酰链中的酯键，血液中LP-PLA2能水解血小板活化因子（Platelet-activatingfactor,PAF），短链磷脂和氧化磷脂等。

心脑血管疾病是最常见的中老年疾病,现在也是首位引起人类死亡原因。近些年,随着生活水平的提高,心脑血管发病率呈年轻化趋势。研究表明，动脉硬化可累及冠状动脉、脑动脉及其它动脉，是冠状动脉性心脏病，脑血栓和其它血栓疾病的病理基础。动脉硬化是一种慢性炎症反应性疾病，炎症反应在动脉粥样斑块形成的起始、发展、破裂，脱落等过程中起着重要作用，而LP-PLA2参与在动脉硬化炎症反应全过程并加重炎症反应。组织学研究发现，活动性动脉硬化斑块内，斑块坏死中心、易损及破裂斑块周围，LP-PLA2浓度显著升高。活动性动脉血管硬化灶内LP-PLA2水解与LDL结合氧化卵磷酯（OX-PC），成为溶血磷脂酰胆碱（lysoPC）和氧化游离脂肪酸（oxNEPAS）。这两个分解物是很强的炎症因子，有单核巨噬细胞趋化因子作用，又能诱导血管内皮细胞分泌细胞粘附因子，促进单核细胞移动到动脉血管硬化灶内，转化为巨噬细胞和泡沫细胞，损伤血管功能；这些聚集的巨噬细胞和泡沫细胞产生更多的LP-PLA2，加重动脉硬化灶部位发炎,增生,导致血小板在此部位积聚,脱落，形成血栓；同时，动脉血管硬化灶中的LP-PLA2大量分泌到血液中，增加血液中LP-PLA2浓度。由此可见，LP-PLA2直接参于动脉硬化灶内炎症反应过程，血液中增高LP-PLA2浓度和酶活性代表动脉硬化灶活动程度，也能代表血栓发生的可能性。

流行病学研究发现，血液中LP-PLA2浓度或酶活性增高人群，其心血管疾病发病率增加。去除其它心血管疾病危险因素，与低浓度LP-PLA2人群相比，高浓度LP-PLA2人群发生心血管疾病可能性增加2倍以上。又有研究发现，高血压人群，同时血液中LP-PLA2浓度增高，发生心血管疾病可能性增加7倍以上。绝经后的妇女，伴有血液中LP-PLA2浓度增高，发生血栓可能性增加64%。Gerber等人测定病人心肌梗死发生时血液中LP-PLA2酶活性，比低LP-PLA2酶活性心肌梗死病人，高LP-PLA2酶活性心肌梗死病人死亡率增加5.35倍；有高LP-PLA2酶活性心肌梗死病人复发率增加两倍多。这些结果表明，血液中增高LP-PLA2酶活性和浓度能预测心肌梗塞和脑血栓的发生，预后，及复发，需要开发测定血液中LP-PLA2酶活性或浓度的试剂盒。

LP-PLA2是激发动脉硬化灶内炎症反应重要因子，促发血栓形成。开发LP-PLA2酶活性抑制剂是阻断脉硬化灶内炎症反应有效途径，能减少血栓发生。在国外,葛兰素史克公司研发出LP-PLA2酶活性抑制剂（Darapladib），能与LP-PLA2酶活性功能区丝氨酸残基作用，并有效阻断血液中LP-PLA2酶活性，降低动脉硬化灶内炎症反应，减少血栓的发生。在国内，需要开发LP-PLA2酶活性抑制剂，用于预防和减少血栓发生。