[发明专利]一种利用重组钝齿棒杆菌全细胞转化生产L-鸟氨酸的方法有效
| 申请号： | 201510526225.5 | 申请日： | 2015-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN105087628A | 公开（公告）日： | 2015-11-25 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;王梅洲;徐美娟;张显;杨套伟 | 申请（专利权）人： | 江南大学;江南大学（如皋）食品生物技术研究所;如皋江大食品生物技术研究所有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/77 | 分类号： | C12N15/77;C12N1/21;C12P13/10 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 重组 钝齿棒 杆菌 细胞 转化 生产 鸟氨酸 方法 | ||
1.一种新型重组表达载体的构建，其特征是以Bacilluscereus基因组DNA为模板，扩增得到精氨酸基因argI，将其克隆到表达载体pXMJ19上，构建重组表达型质粒pXMJ19-argI。
2.一株具有较高精氨酸酶酶活的重组基因工程菌，其特征是将权利要求1中构建的重组载体pXMJ19-argI用电击转化法转化到C.crenatumSDNN403中，argI在IPTG诱导下能够高效的表达。
3.根据权利要求2所述的高精氨酸酶酶活的基因工程菌应用于全细胞转化法生产L-鸟氨酸的方法，其特征在于，以重组菌C.crenatumSDNN403/pXMJ19-argI全细胞作为生物催化剂，以L-精氨酸为底物进行转化法生产L-鸟氨酸。
4.权利要求3所述的生产L-鸟氨酸的方法，其特征是：重组菌C.crenatumSDNN403/pXMJ19-argI接种于10mLLBG培养基中，30℃振荡培养12h后，取2ml转接于200mlLBG(LB+0.5％葡萄糖)30℃培养8h后，添加终浓度为0.7mM的IPTG对重组菌的精氨酸酶进行诱导表达，诱导10h后离心收集重组菌细胞，重悬于200ml底物缓冲液，用于全细胞转化生产L-鸟氨酸。
5.权利要求2所述的菌株在权利要求4所述的菌体培养策略下在转化法生产L-鸟氨酸中的方法，其特征是：优选催化温度为40℃，优选转化pH为9.0，优选Mn2+添加浓度为0.5mM，200g/L底物L-精氨酸，以0.3M碳酸盐为缓冲液，转化合成L-鸟氨酸。
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