[发明专利]密码子优化型1型鸭甲肝病毒VP1基因及其重组蛋白的应用

权利要求书

1.1型鸭甲肝病毒密码子优化型VP1基因，核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。

2.根据权利要求1所述1型鸭甲肝病毒密码子优化型VP1基因，其特征在于，所述基因为针对大肠杆菌表达进行密码子优化获得的VP1基因。

3.权利要求1或2所述1型鸭甲肝病毒密码子优化型VP1基因编码的重组蛋白在制备检测I型鸭甲肝病毒抗体的胶体金免疫层析试纸中的应用。

4.胶体金免疫层析试纸，由底板、硝酸纤维素膜、样品垫、金标垫和吸收垫组成，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上的测试线由浓度≥1.0mg/ml的权利要求1所述基因编码的重组蛋白包被而成，质控线由浓度≥0.4mg/ml的A抗BIgG包被而成；所述金标垫由胶体金标记的浓度≥0.06mg/ml的权利要求1所述基因编码的重组蛋白和胶体金标记的浓度≥0.05mg/ml的A抗BIgG包被而成；所述A抗BIgG为免疫学研究中常规实验动物中除鸭外的任一种动物抗另一种任一种动物IgG。

5.根据权利要求4所述的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上的测试线由浓度为1.0mg/ml的权利要求1所述基因编码的重组蛋白包被而成，质控线由浓度为0.4mg/ml的A抗BIgG包被而成；所述金标垫由胶体金标记的浓度为0.06mg/ml的权利要求1所述基因编码的重组蛋白和胶体金标记的浓度为0.05mg/ml的A抗BIgG包被而成。

6.根据权利要求4或5所述的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述A抗BIgG为羊抗兔IgG。

7.权利要求4～6所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)硝酸纤维素膜上质控线和测试线的喷制：将权利要求1所述基因编码的重组蛋白点于硝酸纤维素膜上形成测试线，将A抗BIgG包被于硝酸纤维素膜上形成质控线，37℃干燥后低温密封保存；

(2)金标垫的制备：将胶体金标记的权利要求1所述基因编码的重组蛋白和胶体金标记的A抗BIgG均匀地喷涂于玻璃纤维素膜上，4℃冻干后低温密封保存；

(3)试纸的组装：分别将样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次粘在底板上，硝酸纤维素膜上所述质控线一端靠近吸收垫，所述测试线一端靠近金标垫，切割成试纸条后，干燥密封低温保存。

8.根据权利要求7所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述测试线和质控线之间的距离为0.6cm，测试线和质控线距硝酸纤维素膜边缘0.2cm。

9.根据权利要求7所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述胶体金标记重组蛋白和A抗BIgG时，金标重组蛋白的最佳标记pH为每毫升金溶液加入8μl0.2mmol/LK₂CO₃溶液，最佳标记量为每毫升金溶液标记12μg重组蛋白；金标A抗BIgG的最佳标记pH为每毫升金溶液加入6μl0.2mmol/LK₂CO₃溶液，最佳标记量为每毫升金溶液标记10μgA抗BIgG。