[发明专利]一种牛种布鲁氏菌分子标记疫苗株及其应用

权利要求书

1.一种重组菌，是将布鲁氏菌的 bp26 蛋白的编码基因替换为 BLS 蛋白的编码基因和L7/L12 蛋白的编码基因，且失活所述布鲁氏菌的 wboA 蛋白的编码基因，得到的菌株；

所述布鲁氏菌为牛种布鲁氏菌BH1菌株，其保藏编号为 CGMCC No.10571；

所述将布鲁氏菌的 bp26 蛋白的编码基因替换为 BLS 蛋白的编码基因和 L7/L12 蛋白的编码基因，且失活所述布鲁氏菌的 wboA 蛋白的编码基因是将布鲁氏菌的 bp26 蛋白的编码基因的部分片段替换为 BLS 蛋白的编码基因和 L7/L12 蛋白的编码基因，且缺失所述布鲁氏菌的 wboA 蛋白的编码基因的部分片段；所述布鲁氏菌的 bp26 蛋白的编码基因的部分片段为序列表中序列 4 的第 58-582 位核苷酸分子 ； 所述 BLS 蛋白的编码基因为序列表中序列 2 的第 504-977 位核苷酸分子 ； 所述 L7/L12 蛋白的编码基因为序列表中序列 2 的第 978-1352 位核苷酸分子 ； 所述布鲁氏菌的 wboA 蛋白的编码基因的部分片段为序列表中序列 5 的第 1-897 位核苷酸分子。

2.根据权利要求 1所述的重组菌，其特征在于 ：所述替换和所述缺失均通过同源重组的方式实现的； 所述将布鲁氏菌的 bp26 蛋白的编码基因的部分片段替换为 BLS 蛋白的编码基因和 L7/L12 蛋白的编码基因是将含有 bp26 蛋白编码基因上游同源臂、BLS 蛋白编码基因、L7/L12蛋白编码基因和 bp26 蛋白编码基因下游同源臂的 DNA 片段导入所述布鲁氏菌中实现同源重组； 所述缺失布鲁氏菌的 wboA 蛋白的编码基因的部分片段是将含有 wboA 蛋白编码基因上游同源臂和 wboA 蛋白编码基因下游同源臂的 DNA 片段导入所述布鲁氏菌中实现同源重组； 所述 bp26 蛋白编码基因上游同源臂的核苷酸序列为序列表中序列 2 中第 1-503 位； 所述 bp26 蛋白编码基因下游同源臂的核苷酸序列为序列表中序列 2 中第 1353-2117位； 所述 wboA 蛋白编码基因上游同源臂的核苷酸序列为序列表中序列 3 中第 1-618 位； 所述 wboA 蛋白编码基因下游同源臂的核苷酸序列为序列表中序列 3 中第 619-1209位。

3.根据权利要求 2 所述的重组菌，其特征在于 ：所述含有 bp26 蛋白编码基因上游同源臂、BLS 蛋白的编码基因、L7/L12 蛋白的编码基因和 bp26 蛋白编码基因下游同源臂的 DNA片段为序列表中序列 2 ；所述含有 wboA 蛋白编码基因上游同源臂和 wboA 蛋白编码基因下游同源臂的 DNA 片段为序列表中序列3。

4.一种布鲁氏菌疫苗，其活性成分为权利要求 1-3任一所述的重组菌。

5.权利要求 1-3任一所述的重组菌在制备如下 1)-6) 中的应用 ： 1) 布鲁氏菌疫苗 ；

2) 降低动物组织载菌量的产品 ； 3) 诱发细胞免疫的产品 ； 4) 诱发体液免疫的产品 ； 5) 预防和/或治疗布鲁氏菌病的产品 ； 6) 鉴别或辅助鉴别待测样本为权利要求4所述的布鲁氏菌疫苗免疫样本还是野生型布鲁氏菌感染样本的产品。

6.权利要求4所述布鲁氏菌疫苗在制备具有如下1)-5)中至少一种功能的产品中的应用 ： 1) 降低动物组织载菌量 ； 2) 诱发细胞免疫 ； 3) 诱发体液免疫 ； 4) 预防和/或治疗牛布鲁氏菌病和/或羊布鲁氏菌病和/或猪布鲁氏菌病 ； 5) 鉴别或辅助鉴别待测样本为权利要求4所述的布鲁氏菌疫苗免疫样本还是野生型布鲁氏菌感染样本。