[发明专利]一种牛肉中齐帕特罗、西布特罗、克仑普罗和班布特罗促生长剂残留量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种牛肉中齐帕特罗、西布特罗、克仑普罗、班布特罗等促生长剂药物残留量的测定方法。

背景技术

齐帕特罗、西布特罗、克仑普罗、班布特罗等药物对动物具有明显地促生长、增加瘦肉率、改善生产性能等作用。但是残留有这些药物的的牛肉如果被人食用后，会出现心悸、四肢肌肉颤动、心律失常等副作用，严重影响人类的健康。目前还没有相关的牛肉中残留以上四种药物的测定方法。为了保证广大居民食品安全，杜绝和监控以上四种药物在牛肉中的残留，防止在突发事件中的被动，需要对牛肉组织中上述四种促生长剂药物含量进行检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种牛肉中齐帕特罗、西布特罗、克仑普罗、班布特罗等促生长剂药物残留量的测定方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种牛肉中促生长剂残留量的测定方法，所述促生长剂为齐帕特罗、西布特罗、克仑普罗和班布特罗，包括如下步骤：

（1）样品的提取：取一定量的牛肉样品，绞碎，加入β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶，在pH=5.2下，水解16h，然后用高氯酸调节pH至1.0±0.2，离心；

（2）样品的净化：将离心得到的上清液pH调节至9.5±0.2，依次用乙酸乙酯、叔丁基甲醚萃取，合并有机相，氮气吹干，再用2%vol甲酸水溶液溶解，得到的溶液过阳离子交换固相萃取柱，依次用2%vol甲酸水溶液、水、甲醇淋洗，抽干，再用氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，用甲酸甲醇水溶液溶解，膜过滤，得滤液；

（3）步骤（2）所得的滤液上液质联用仪，得到所述促生长剂的色谱峰面积，液相色谱条件：C18柱，用0.1%vol甲酸水溶液-甲醇体系进行梯度洗脱；

（4）将所述促生长剂标准品添加到空白样品中，制备成一系列浓度的空白添加试样，按步骤（1）-（3）处理，得到浓度-峰面积的标准曲线；

（5）根据步骤（3）和步骤（4）的结果即可得出牛肉中所述促生长剂的残留量。

进一步，步骤（2）所述的甲酸甲醇水溶液为v:v=20:80的0.1%vol甲酸甲醇溶液-0.1%vol甲酸水溶液。

进一步，步骤（3）梯度洗脱时，甲醇体积百分比随时间变化如下：0～4min20%；4～5min60%；5～6min80%。

附图说明

图1为促生长剂的液相色谱—串联质谱图，从上至下依次为西布特罗、齐帕特罗、克伦普罗和班布特，各种促生长剂的浓度都为0.5μg/mL。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

1.试剂和仪器

促生长剂：齐帕特罗、西布特罗、克伦普罗、班布特罗标准品，纯度均大于98.0%。甲酸（HCOOH）：分析纯。乙酸乙酯（C₄H8O₂）：分析纯。甲醇（CH₃OH）：色谱纯。高氯酸（HClO₄）：优级纯。氢氧化钠（NaOH）：优级纯。氨水(NH₄OH)：优级纯。乙酸铵（CH₃COONH₄）。0.1mol/L高氯酸溶液。5mol/L氢氧化钠溶液。5%vol氨水甲醇溶液（氨化甲醇）。0.1%vol甲酸水溶液。β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶(β-glucuronidasc/arylsulfatasc)：酶活性≥100,000units/min。

标准储备液：分别称取上述4种促生长剂标准品10.0mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，于4℃条件下保存。

标准工作液：分别吸取上述各储备溶液，用甲醇稀释，配成浓度为1.0μg/mL的混和标准储备溶液。根据需要，用甲醇稀释上述标准储备溶液，配制成不同浓度的标准工作液。

MCX阳离子交换固相萃取小柱(60mg，3mL)或其他等效柱。微孔滤膜：0.22μm。液相色谱-串联质谱仪（简称液质联用仪）。电子分析天平：感量0.1mg。冷冻高速离心机。氮吹仪。固相萃取装置。超声清洗仪。涡旋混合器。恒温振荡水浴。

2.促生长剂残留量的测定

2.1牛肉样品的处理