[发明专利]分化细胞的新型制备方法

说明书

本发明的目的在于提供一种扩增期望的分化阶段的细胞而制备特定细胞的方法。本发明提供一种特定细胞的制备方法，该方法是分化诱导细胞而制备特定细胞的方法，其中，为了扩增期望的分化阶段的细胞，在该期望的分化阶段的细胞内使癌基因强制表达。进一步地，还提供一种特定细胞的制备方法，抑制由在该期望的分化阶段的细胞内表达的癌基因而诱导的、癌基因诱导性细胞衰老(OIS)。

本发明专利申请是中国专利申请号为201080042161.7(PCT申请号为PCT/JP2010/065903)、申请日为2010年9月15日、发明名称为“分化细胞的新型制备方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种制备特定的分化细胞的方法以及根据该方法制备的细胞。尤其，本发明涉及一种制备分化的血球细胞的方法以及根据该方法制备的血球细胞。

背景技术

在为了治疗患者而需要特定的细胞时，需要确保能够达到治疗目的的充足数量的细胞。然而，由于从机体获取用于治疗的充足量的细胞较为困难，因此尝试了在机体外例如从其前体细胞等分化诱导目的细胞而制备的方法等。

在治疗与血液相关的疾病时，或者在进行外科治疗时，需要用于治疗的血球细胞。在血球细胞中，尤其血小板、前血小板(proplatelet)作为血液凝固(止血)所必须的细胞，进一步地巨核细胞作为产生血小板的细胞，是需求特别大的细胞。特别是血小板在白血病、骨髓移植、抗癌治疗等方面需要的量较多，且稳定供给的必要性高。迄今为止，为了确保血小板的供给，除了通过从献血者的血液中提取的方法外，采用了给予如TPO的类似物(mimetics)制剂的方法、从脐带血或骨髓细胞分化出巨核细胞的方法等。进一步地，尝试了在机体外扩增造血干细胞或造血前体细胞，从这些前体细胞制备血球细胞的方法等。例如，目前报道有从小鼠ES细胞建立造血干细胞株的方法(专利文献1)、从灵长类动物的胚胎干细胞向造血细胞分化的方法(专利文献2)或者在机体外简便且稳定地扩增维持造血干细胞的未分化性的CD34阳性/CD38阴性细胞的方法(专利文献3)等。

并且，在分化诱导细胞时，多功能干细胞的有用性很高。ES细胞和iPS细胞等多功能干细胞能够作为人工制备血小板等血球细胞的来源(source)而利用。近年来，由于iPS细胞的建立，多功能干细胞的有用性在再生医疗中作为细胞疗法的重要来源而进一步受到了关注。迄今为止，例如Takayama等人成功地从人类ES细胞分化诱导出巨核细胞以及血小板，其结果，出现了作为血小板输血源而利用从ES细胞分化的血小板的可能性(专利文献4以及非专利文献1)。进一步地，发明者们已确立从iPS细胞制备巨核细胞以及血小板的方法，可以解决在ES细胞来源的血小板的输血中难以回避的白血球抗原(human leukocyteantigen，HLA(人类白细胞抗原))的相容性问题。并且，以往，对于从献血者的血液提供的血小板而言，由于献血人数的持续不足等而难以稳定地供给充足的血小板，对于该问题，也认为可以通过从ES细胞或者iPS细胞分化诱导血小板而解决。但是，在迄今为止的方法中，从iPS细胞或者ES细胞制备的血小板由于制备量较少，且每次制造时都要通过一系列工艺才能制备，因此目前期望将以往的方法改善成确保血小板量的稳定性的有效的方法。

为了稳定地提供充足的这种巨核细胞和血小板等血球细胞而需要解决的问题，可以说在其他细胞的供给中也存在。

在通过细胞分化诱导而制备期望的细胞时，同样由于不容易大量制备期望的细胞的前体细胞，因此在目前阶段，最终难以确保充足量的分化的期望细胞。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2006-141356号公报

专利文献2：日本特开2004-350601号公报

专利文献3：日本特开2006-61106号公报

专利文献4：WO2008/041370

非专利文献