[发明专利]嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化CD19靶向性的NKT细胞及其应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤生物制品领域，具体地，涉及过继免疫治疗中的一种嵌合抗原受体CD19ScFv-2-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重组表达载体、工程化CD19靶向性的NKT细胞(CAR19-2-NKT细胞)及其应用。

背景技术

自然杀伤细胞(NKT)是一种特殊类型的T淋巴细胞亚群，具有T细胞和NK细胞细胞两重性质。NKT细胞能表达T细胞的TCR与NK细胞的NKR-P1两种受体，在TCR和NKR介导下，NKT细胞能够产生大量的IL-4及INFγ，对肿瘤细胞发挥细胞杀伤作用。NKT细胞通过自身表面的CD16与特异性抗体的Fc段结合，发挥ADCC(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity)作用。但在抗体依赖的细胞介导的杀伤作用过程中，由于抗体能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合，NKT细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞，因此抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的，但NKT细胞对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。另外，通常情况下，输注的NKT细胞在患者体内半衰期为2周左右，有效期短暂，需要反复多次输注。另外，NKT细胞本身缺少特异性抗体，不足以在肿瘤周围或者瘤巢中富集，制约了NKT细胞对恶性肿瘤的靶向治疗。而且，研究表明，NKT细胞不是对所有的肿瘤都有杀伤效果，对部分肿瘤的杀伤作用比较弱，特异杀伤活性有待提高。

CD19分子是B淋巴细胞表面发挥特异性信号转导的受体，存在于B细胞成熟的各个阶段，在B祖细胞阶段出现并稳定持续地表达。CD19作为B细胞系特异的细胞表面分化抗原，仅表达于前B细胞和成熟B细胞表面，而在造血干细胞、浆细胞和其他正常组织细胞中不表达。而且，CD19分子在膜上比较暴露，容易接近，与单克隆抗体结合后无显著内化及脱落，也不会因为与抗体的结合而发生抗原调变。此外，近期关于癌基因MYC基因如何推动B淋巴细胞恶性肿瘤的发生与发展的研究，发现CD19对稳定Myc蛋白来说是绝对必要的，当Myc基因是稳定的，并处于较高水平时，Myc基因会促使癌症发展，并且，Myc蛋白水平高的患者更可能死于淋巴瘤。CD19可能是控制Myc基因通路上的开关，而控制通断开关可能代表了治疗淋巴细胞肿瘤的有力工具。基于以上现象，故CD19成为治疗CD19阳性的急性B淋巴细胞白血病的一个重要靶点。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中NKT细胞对肿瘤的杀伤作用比较弱、特异杀伤活性有待提高的缺陷，提供一种嵌合抗原受体CD19ScFv-2-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重组表达载体、工程化CD19靶向性的NKT细胞(CAR19-2-NKT细胞)及其应用，嵌合抗原受体CD19ScFv-2-CD8-CD137-CD3ζ修饰的NKT细胞在治疗进展期CD19阳性的急性B淋巴细胞白血病时，对白血病细胞具有很好的特异杀伤活性，且对已经过多次治疗(如放疗、化疗及其他药物对症治疗等)但均无明显疗效的进展期CD19阳性的急性B淋巴细胞白血病患者有一定的治疗效果。

本发明的发明人在研究中意外发现，本发明的嵌合抗原受体CD19ScFv-2-CD8-CD137-CD3ζ对NKT细胞具有高的感染效率，且感染后得到的CAR19-2-NKT细胞在体外有高效的杀瘤活性，同时采用CAR19-2-NKT细胞治疗进展期CD19阳性的急性B淋巴细胞白血病时，对白血病细胞具有很好的特异杀伤活性，且对已经过多次治疗(如放疗、化疗及其他药物对症治疗等)但均无明显疗效的进展期CD19阳性的急性B淋巴细胞白血病患者有一定的治疗效果。

因此，为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体为CD19ScFv-2-CD8-CD137-CD3ζ，由CD19的单链抗体(CD19ScFv-2)、CD8的铰链区(hinge区)和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域串联构成，编码所述CD19ScFv-2的基因的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示。

第二方面，本发明提供了编码上述嵌合抗原受体的基因。

第三方面，本发明提供了含有上述基因的重组表达载体。

第四方面，本发明提供了一种工程化CD19靶向性的NKT细胞，所述NKT细胞是上述嵌合抗原受体CD19ScFv-2-CD8-CD137-CD3ζ修饰的NKT细胞。

第五方面，本发明提供了上述工程化CD19靶向性的NKT细胞在制备用于治疗白血病的制剂中的应用。