[发明专利]嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化CD138靶向性的NKT细胞及其应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤生物制品领域，具体地，涉及过继免疫治疗中的一种嵌合抗原受体CD138ScFv-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重组表达载体、工程化CD138靶向性的NKT细胞(CAR138-NKT细胞)及其应用。

背景技术

自然杀伤细胞(NKT)是一种特殊类型的T淋巴细胞亚群，具有T细胞和NK细胞细胞两重性质。NKT细胞能表达T细胞的TCR与NK细胞的NKR-P1两种受体，在TCR和NKR介导下，NKT细胞能够产生大量的IL-4及INFγ，对肿瘤细胞发挥细胞杀伤作用。NKT细胞通过自身表面的CD16与特异性抗体的Fc段结合，发挥ADCC(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity)作用。但在抗体依赖的细胞介导的杀伤作用过程中，由于抗体能与靶细胞上的相应抗原表位特异性结合，NKT细胞可杀伤任何已与抗体结合的靶细胞，因此抗体与靶细胞上的抗原结合是特异性的，但NKT细胞对靶细胞的杀伤作用是非特异性的。另外，通常情况下，输注的NKT细胞在患者体内半衰期为2周左右，有效期短暂，需要反复多次输注。另外，NKT细胞本身缺少特异性抗体，不足以在肿瘤周围或者瘤巢中富集，制约了NKT细胞对恶性肿瘤的靶向治疗。而且，研究表明，NKT细胞不是对所有的肿瘤都有杀伤效果，对部分肿瘤的杀伤作用比较弱，特异杀伤活性有待提高。

多发性骨髓瘤(Multiplemyeloma，MM)是浆细胞异常增生的B细胞恶性肿瘤，以骨髓中积聚大量的恶性浆细胞并分泌单克隆免疫球蛋白为特征。骨髓瘤细胞表面表达一系列的粘附分子如CD138。CD138是一种属于跨膜粘蛋白聚糖家族成员，与骨髓微环境中的生长因子和基质成分相结合，介导多发性骨髓瘤细胞的粘附和归巢。随着对CD138研究的逐步深入，人们发现CD138在机体的损伤修复及肿瘤的生长、迁移中都起了关键作用。目前CD138被认为是浆细胞最特异的表面标志物，研究显示，CD138分子在B细胞恶性肿瘤中的表达非常复杂，在MM患者骨髓和外周血中的浆细胞表达，而骨髓中的造血前体细胞或淋巴细胞不表达。CD138分子水平的升高可以作为骨髓瘤预后不良的独立指标，并且当MM细胞呈现凋亡时，膜表面CD138分子表达下调或丢失，可反映MM患者体内肿瘤细胞的负荷。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中NKT细胞对肿瘤的杀伤作用比较弱、特异杀伤活性有待提高的缺陷，提供一种嵌合抗原受体CD138ScFv-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重组表达载体、工程化CD138靶向性的NKT细胞(CAR138-NKT细胞)及其应用，嵌合抗原受体CD138ScFv-CD8-CD137-CD3ζ修饰的NKT细胞在治疗进展期CD138阳性的多发性骨髓瘤时，对骨髓瘤细胞具有很好的特异杀伤活性，且对已经过多次治疗(如放疗、化疗及其他药物对症治疗等)但均无明显疗效的进展期CD138阳性的多发性骨髓瘤患者有一定的治疗效果。

本发明的发明人在研究中意外发现，本发明的嵌合抗原受体CD138ScFv-CD8-CD137-CD3ζ对NKT细胞具有高的感染效率，且感染后得到的CAR138-NKT细胞在体外有高效的杀瘤活性，同时采用CAR138-NKT细胞治疗进展期CD138阳性的多发性骨髓瘤时，对骨髓瘤细胞具有很好的特异杀伤活性，且对已经过多次治疗(如放疗、化疗及其他药物对症治疗等)但均无明显疗效的进展期CD138阳性的多发性骨髓瘤患者有一定的治疗效果。

因此，为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体为CD138ScFv-CD8-CD137-CD3ζ，由CD138ScFv、CD8的铰链区(hinge区)和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域串联构成。

第二方面，本发明提供了编码上述嵌合抗原受体的基因。

第三方面，本发明提供了含有上述基因的重组表达载体。

第四方面，本发明提供了一种工程化CD138靶向性的NKT细胞，所述NKT细胞是上述嵌合抗原受体CD138ScFv-CD8-CD137-CD3ζ修饰的NKT细胞。

第五方面，本发明提供了上述工程化CD138靶向性的NKT细胞在制备用于治疗肿瘤的制剂中的应用。