[发明专利]嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化CD33靶向性的NKT细胞及其应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤生物制品领域，具体地，涉及过继免疫治疗中的一种嵌合抗原受体CD33ScFv-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重组表达载体、工程化CD33靶向性的NKT细胞(CAR33-NKT细胞)及其应用。

背景技术

急性髓系白血病(acutemyelocyticleukemia，AML)包括所有非淋巴细胞来源的急性白血病，是造血系统的髓系原始细胞克隆性恶性增殖性疾病，是一个具有高度异质性的疾病群，它可以由正常髓系细胞分化发育过程中不同阶段的造血祖细胞恶性变转化。

CD33在90％以上的急性髓系白血病患者的原始细胞表面高表达，并且白血病干细胞表面也表达CD33，而仅在部分正常的造血干细胞表达低水平的CD33。在炎症及免疫应答过程中，CD33可调控白细胞的功能，故CD33成为治疗急性髓系白血病的理想靶点。

目前，在治疗进展期CD33阳性的急性髓系白血病患者时，CD33的单克隆抗体与化疗结合应用已经处于临床研究阶段，但是，临床结果表明，CD33的单克隆抗体与化疗结合应用会引起一定的耐药性和化疗抵抗。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中采用CD33的单克隆抗体与化疗结合应用治疗进展期CD33阳性的急性髓系白血病患者时引起的耐药性和化疗抵抗的缺陷，提供一种嵌合抗原受体CD33ScFv-CD8-CD137-CD3ζ及其基因和重组表达载体、工程化CD33靶向性的NKT细胞(CAR33-NKT细胞)及其应用，嵌合抗原受体CD33ScFv-CD8-CD137-CD3ζ修饰的NKT细胞在治疗进展期CD33阳性的急性髓系白血病时，能够有效避免采用CD33的单克隆抗体与化疗结合应用时引起的耐药性和化疗抵抗，对白血病细胞具有一定的特异杀伤活性。

本发明的发明人在研究中意外发现，本发明的嵌合抗原受体CD33ScFv-CD8-CD137-CD3ζ对NKT细胞具有高的感染效率，且感染后得到的CAR33-NKT细胞在体外有高效的杀瘤活性，同时采用CAR33-NKT细胞治疗进展期CD33阳性的急性髓系白血病时，能够有效避免采用CD33的单克隆抗体与化疗结合应用时引起的耐药性和化疗抵抗，对白血病细胞具有一定的特异杀伤活性。

因此，为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体为CD33ScFv-CD8-CD137-CD3ζ，由CD33ScFv、CD8的铰链区(hinge区)和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域串联构成。

第二方面，本发明提供了编码上述嵌合抗原受体的基因。

第三方面，本发明提供了含有上述基因的重组表达载体。

第四方面，本发明提供了一种工程化CD33靶向性的NKT细胞，所述NKT细胞是上述嵌合抗原受体CD33ScFv-CD8-CD137-CD3ζ修饰的NKT细胞。

第五方面，本发明提供了上述工程化CD33靶向性的NKT细胞在制备用于治疗白血病的制剂中的应用。

在治疗进展期CD33阳性的急性髓系白血病时，本发明的嵌合抗原受体CD33ScFv-CD8-CD137-CD3ζ对NKT细胞具有高的感染效率，且感染后得到的CAR33-NKT细胞，即工程化CD33靶向性的NKT细胞，在体外具有高效的杀瘤活性，在体内能够不依赖于白介素2而持续长久的存在，且能够特异性结合CD33抗原，明显延长免疫细胞在患者体内的存活时间，增强免疫细胞靶向识别急性髓系白血病细胞表面CD33抗原的能力，释放细胞因子并加强对急性髓系白血病细胞的特异杀伤活性，而且确实能够有效避免采用CD33的单克隆抗体与化疗结合应用时引起的耐药性和化疗抵抗。本发明的工程化CD33靶向性的NKT细胞具有较低的毒副作用，患者具有较好的耐受性，为治疗进展期CD33阳性的急性髓系白血病提供了一种新的选择，具有良好的产业应用前景。

本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

图1为流式细胞术对分离培养的NKT细胞表型分析的结果。

图2为本发明的慢病毒表达载体pWPT-CD8-CD137-CD3ζ的限制性内切酶MluI/SalI双酶切片段的电泳鉴定图。

图3为本发明的慢病毒表达载体pWPT-CD33ScFv-CD8-CD137-CD3ζ的限制性内切酶BamHI/SalI双酶切片段的电泳鉴定图。