[发明专利]一种建立鉴别土壤样品来源筛选库的方法

权利要求书

1.一种建立鉴别土壤样品来源筛选库的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）取已知来源的土壤样品，使用门塞尔比色卡检测样品颜色，将土样与带标准色阶的卡片相对照，检测土壤颜色，根据检测结果进行分类；

以门塞尔标准色卡为对照，当样品主色调为红色时，样品被鉴定为红色土壤；当样品主色调为黄色时，样品被鉴定为黄色土壤；当样品主色调为黑色，样品被鉴定为黑色土壤；

（2）采用标准吸管法检测样品的粒径，根据检测结果进行分类；

当检测结果为50～2000µm时，为砂质土壤；当检测结果为2～50µm时，为壤质土壤；当检测结果小于2µm时，为黏质土壤；

（3）将样品采用扫描电子显微镜对扫描图像进行检测，计算颗粒平均面积S，并分别归入S＜100µm²、100µm²≤S＜200µm²、200µm²≤S＜300µm²、300µm²≤S＜400µm²、400µm²≤S＜500µm²、500µm²≤S＜600µm²、600µm²≤S＜700µm²、700µm²≤S组中；

（4）采用能谱法检测土壤样品，对Na、Ca、Fe、Ti元素进行分组建库；

Na质量含量低于0.5%为低钠区，Na质量含量为0.5～1.5%为中钠区，Na质量含量高于1.5%为高钠区；Ca质量含量低于1%为低钙区，Ca质量含量为1～5%为中钙区，Ca质量含量高于5%为高钙区；Fe质量含量低于3%为低铁区，Fe质量含量为3～7%为中铁区，Fe质量含量高于7%为高铁区；Ti质量含量低于0.05%为极低钛区，Ti质量含量为0.05～0.5%为低钛区，Ti质量含量为0.5～1.0%为中钛区，Ti质量含量高于1.0%为高钛区；

（5）将样品采用红外色谱法检测，定性分析样品中特殊的化学官能团，分析土壤中含有的化合物并进行分类；

所述土壤中含有的化合物检测结果分类如下：

当含有468.6~457cm^-1峰时，含有C-X基团，为有机卤素化合物；

当含有484~532 cm^-1峰时，含有P-Cl基团，为有机磷化合物；

当含有1612~1616cm^-1峰时，含有C=C基团，为烯烃类物质、含苯环类物质；

当含有3107~3448cm^-1峰时，含有NH基团，为酰胺类化合物；

当含有740~779cm^-1峰时，含有O-N=O基团，为亚硝酸化合物；

当含有1379~1436cm^-1峰时，含有C-N=O基团，为亚硝基化合物；

当含有1014~1024cm^-1峰时，含有C-O-C基团，为醚、酯类有机物；

当含有3591~3626cm^-1峰时，含有OH基团，为醇、酚类有机物；

（6）提取样品中的DNA，进行荧光引物PCR，然后经琼脂糖凝胶电泳纯化，经限制性内切酶MspⅠ酶切，根据T-RFLP图谱中优势T-Fs的有效片段长度的差异，对样品进行分类；

所述有效片段为长度在50~650bp之间，且Ap值大于1%的片段；

所述PCR扩增引物序列如下：

27F-FAM：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；

1492R：5′-CGGCTACCTTGTTACGACTT-3′；

PCR扩增体系如下，总体系50μL：

Mix缓冲液 25μL

引物27F-FAM 2μL

引物1492R 2μL

基因组总DNA 2μL

ddH₂O19μL；

PCR扩增程序如下：

在94℃下预变性3 min，94℃下变性30 S，54℃退火30S，72℃延伸1min20 S，进行36个循环后，72℃补延伸10 min；

（7）分别将不同的样品按照步骤（1）～（6）的方式进行分类，根据样品的来源地对应不同分类，建立鉴别土壤样品来源筛选库。