[发明专利]检测莠去津残留的酶联免疫试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于酶联免疫检测领域，具体涉及一种用于检测莠去津残留的酶联免疫试剂盒，其特别适于玉米、甘蔗样本中莠去津残留的检测。

背景技术

莠去津（Atrazine），又名阿特拉津、莠去尽、阿特拉嗪、园保净，C₈H₁₄ClN₅，中文名2-氯-4-乙胺基-6-异丙氨基-1,3,5-三嗪，是选择性内吸前导型苗前、苗后除草剂，根吸收为主，茎叶吸收很少，迅速传导到植物分生组织及叶部，干扰光合作用，使杂草致死，是目前世界上使用范围最广、使用量最大的一种旱田除草剂，主要施用于玉米、高粱、果园和林地等，用于防除一年生禾本科杂草，对某些多年生的杂草也有一定的抑制作用。在玉米等抗性作物体内被玉米酮酶分解生成无毒物质，因而对作物安全。杀草作用和选择性同西玛津，易被雨水淋洗至较深处，致使对某些深根性杂草有抑制作用。

莠去津外观为白色的细粉末，不易溶于水，在水中的溶解度仅为33mg/L，易溶于多数有机溶剂，在微酸性或微碱性的介质中比较稳定。对人体的皮肤和眼睛有刺激作用。莠去津结构稳定、持效期长，加上多年的使用，在自然环境中不易被分解，已经形成了对土壤、水体等自然媒介的污染，在土壤中，可被微生物分解，残效期视用药量、土壤质地等因素影响，可长达半年左右，污染自然环境，而且还会残留在玉米、高粱、果蔬等农产品的根系及茎中。研究发现莠去津的残留对水生动植物、两栖类生物、哺乳动物、人类细胞都有不同程度的损害作用，可能对被其污染地区的水生生物生长繁殖产生影响，长期接触莠去津的人患前列腺癌的比率要比平均水平高出3.5倍以上，可导致乳腺癌和卵巢癌的发生，也可能造成人类血管系统发生问题和再生繁殖困难。已有的研究证明莠去津对动物的生殖功能有极大的影响，已被世界野生动物基金会（WWF）列为环境荷尔蒙（内分泌干扰剂）的可疑物质，有扰乱内分泌的作用，是人类潜在的致癌物。因此，对食品中莠去津的检测和监控具有重要的现实意义。我国对莠去津在玉米和甘蔗中的最高残留限量，制定了严格的标准，最大残留限量为0.05mg/kg。

从现有技术和相关检测标准看，目前针对莠去津残留的检测方法主要是仪器方法，最常用的方法是气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）和气-质联用法（GC-MS）等，仪器方法具备检测灵敏度高、特异性强等优势，但是检测样本前处理繁琐、耗时，样品还需提取和净化处理，同时仪器检测方法需要昂贵的大型仪器和设备，配备专业的检测技术人员，进行操作和管理，无法进行现场大规模检测，时效性差，难以推广。

近年来药物残留免疫检测技术已经在食品质量安全快速检测中，得到了广泛的应用，且逐渐被人们所认可，酶联免疫检测技术具有样品前处理简单，检测快速、灵敏、特异性好、准确度高、重复性较好等特点，非常适用于农产品中农药残留的快速检测，从而弥补仪器检测的不足。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够检测莠去津残留的酶联免疫试剂盒，采用间接竞争ELISA方法，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量检测方法和试剂盒制备方法，该方法对玉米、甘蔗的检测限为27μg/kg，灵敏度为1μg/kg。

本发明试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、莠去津标准品溶液、酶标二抗、抗体浓缩液、底物显色液A液、底物显色液B液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为莠去津偶联抗原。

所述莠去津偶联抗原是由莠去津半抗原与载体蛋白偶联得到，所述莠去津半抗原是由取代反应得到，所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。

所述莠去津特异性抗体是以莠去津偶联抗原作为免疫原制备获得，所述莠去津特异性抗体可为莠去津单克隆抗体或莠去津多克隆抗体，其中优选莠去津单克隆抗体。

所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体，其中优选羊抗鼠抗抗体。

所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶标记的抗抗体是采用戊二醛法或过碘酸钠法将标记酶与抗抗体进行偶联得到的。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括莠去津标准品溶液、底物显色液A液和B液、终止液、洗涤液、复溶液。

所述标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L、1μg/L、3μg/L、9μg/L、27μg/L、81μg/L。