[发明专利]一种从花生壳中提取木犀草素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域的提取方法，具体说是一种从花生壳中提取木犀草素的方法。

背景技术

花生壳即为花生的果壳。花生果实为荚果，形状有蚕茧形，串珠形和曲棍形。壳的颜色多为黄白色，也有黄褐色、褐色或黄色的，这与花生的品种及土质有关。

花生壳在生活中很常见，大多数时候都把它们当垃圾处理，有的直接烧掉，还有的甚至直接扔掉，没能把花生壳利用好，非常浪费。植物身上都是宝，经过科学的处理，会给人们带来更多的收益。花生壳中含有将近60％的粗纤维，居粗饲料之首。花生壳营养成分中干物质占90.3％，其中粗蛋白质4.8-7.2％，粗脂肪1-1.1％，粗纤维素65.7-79.3％，半纤维素10.1％，可溶性碳水化合物为10.6-21.2％，另外花生壳还含有维生素和矿物质及部分氨基酸。

木犀草素(luteolin)是一种天然黄酮类化合物，存在于多种植物中。具有多种药理活性，如消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等，临床主要用于止咳、祛痰、消炎、治疗心血管疾病、治疗“肌萎缩性脊髓侧索硬化症”，SARS，肝炎等。

木犀草素在自然界中分布广泛，因最初是从木犀草科(Resedaceae)木犀草属草本植物木犀草(ResedaodorataL.)的叶、茎、枝中分离出而得名，可从多种天然药材、蔬菜果实中分离得到。目前发现主要存在于金银花、菊花、荆芥、白毛夏枯草、洋蓟、紫苏属、黄芩属、裸花紫珠等天然药材中，以及芽甘蓝、洋白菜、菜花、甜菜、椰菜、胡萝卜、芹菜、甜椒、辣椒、落花生等蔬菜果实中，其它如橄榄油和红酒等植物产品以及野凤仙花、百里香草、唇形科植物全叶青兰草、筋骨草等也含有木犀草素。酸角果肉中不含木樨草素,而果壳中含有木樨草素,以前还见酸豆叶子中含有木樨草素的报道。

目前，获得木犀草素，包括从天然产物中提取外或者采用人工合成的方法获得：

提取工艺一般包括：

1、药材预处理：富含木犀草素的药材，经过洗涤、干燥后，粉碎成粗粉备用；

2、提取纯化：药材粉末加入甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，回流提取，提取液减压浓缩后以石油醚、环己烷等溶剂萃取脱脂，水相过弱极性的大孔吸附树脂，用水洗涤至流出液无色后，以95％乙醇为洗脱剂洗脱，洗脱减压浓缩、真空干燥并重结晶后得到木犀草素纯品。

人工合成的方法：

1、半合成路线：以橙皮中提取的具有生物活性的橙皮苷为原料，经过三步反应得到木犀草素，产品总收率约40-47％。

第一步为脱氢反应：橙皮苷在碘/吡啶、碘/二甲基亚砜/硫酸等体系下脱氢，反应温度50-120℃，反应时间5-16小时，析出物水洗后碱液溶解，再加入甲醇并调节PH至酸性，析出物抽滤、洗涤、干燥后得到地奥明。

第二步为水解脱糖苷反应：地奥明在甲醇/盐酸，乙二醇/硫酸，乙二醇/盐酸，乙醇/盐酸，甲醇/硫酸等水解体系下水解脱糖苷，反应温度50-120℃，反应时间1-5小时，冷却析出反应产物，经有机溶剂重结晶得到香叶木素。

第三步为脱甲基反应：香叶木素在氢溴酸、氢溴酸/乙酸酐、氢碘酸/乙酸酐等脱甲基试剂体系下脱甲基，反应温度70-120℃，反应时间5-12小时，冷却析出的黄色产物抽滤后洗涤至中性，低温干燥得到木犀草素粗品，有机溶剂重结晶后得到浅黄色木犀草素纯品。

2、全合成路线：以间苯三酚为原料合成木犀草素，产品总收率约为34％。

第一步：间苯三酚与3,4-二甲氧基苯甲酰乙酸乙酯在140-160℃，真空(1330Pa)下回流2小时，稍冷后加入二苯醚，140-160℃，真空(1330Pa)下反应4～5小时脱醇脱水，冷却后抽滤，加入95％乙醇得到中间体3',4'-二甲氧基-5,7-二羟基黄酮。

第二步：3',4'-二甲氧基-5,7-二羟基黄酮加入催化剂无水吡啶，100℃下再加入催化剂三氯化铝，160-180℃反应3-5小时脱去3'，4'号位上的两个甲基，反应物放入水中进行水解，冷却得到木犀草素粗品，粗品洗涤、重结晶后得到木犀草素纯品。

3、生物合成：LeonardE等建立了一个由肉硅酸-4-羟化酶、辅酶A连接酶、查耳酮合成酶、苯基丙乙烯酮异构酶等构成的酿酒酵母4步重组黄烷酮的途径。将黄酮合成酶引入黄烷酮重组酵母菌株内，可将多种酚丙醇酸类前体转化为黄酮分子，如白杨素、芹菜素、木犀草素等。

发明内容

本发明的目的是提供一种从花生壳中提取木犀草素的方法，具有工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。