[发明专利]车前子多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于生物提取技术领域，具体涉及车前子多糖的提取方法。

背景技术

车前子为车前科植物Plantago asiatica L.或平车前Plantago depressa Willd.的干燥成熟种子，具有利水、清热、明目、祛痰的功效，用于小便不通，淋浊带下，尿血，暑湿泻痢，咳嗽多痰。研究表明车前子多糖是由木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸等组成的杂多糖，该多糖是一种部分发酵性膳食纤维，其分子量为几千到上百万不等。众所周知，采用不同的提取方法，所得到的车前子多糖的成分不同，最终带来的功效也不同。目前常规的车前子多糖的提取工艺包括以下步骤：1)将车前子破碎用6～12倍重量的80～95％乙醇回流2～3次，每次回流2～3h，除去脂溶性杂质；2)将残渣加6～12倍重量的蒸馏水回流提取2～3次，每次回流提取2～3h，滤液浓缩至药材0.2～1.0体积，加入80～95％乙醇沉淀，离心得沉淀；3)沉淀依次用2～4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤；4)洗涤后的沉淀用0.5～2倍重量的蒸馏水溶解，以分子量大小为3×10³～1.2×10⁴的透析袋透析24～72h；5)将透析液浓缩，加入乙醇沉淀，离心得沉淀；沉淀依次用2～4倍重量的无水乙醇，丙酮分别洗涤，洗涤后的沉淀用蒸馏水溶解，采用弱酸弱碱性阴、阳离子交换树脂串联法脱去色素和蛋白质，减压浓缩洗脱液，即得车前子多糖。经验证，该多糖不仅具有整肠通便、降低血脂、调节血糖的功效，还具有良好的免疫促进作用。然而，本申请人在上述提取方法的基础上加以改进，提取的车前子多糖的免疫促进作用明显提高。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种车前子多糖的提取方法，该方法提取的车前子多糖具有较强的免疫促进作用。

本发明提供的技术方案是车前子多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)车前子破碎，加入其20～30倍重量的水，回流提取2～3次，每次提取1～3h，过滤，收集滤液备用；

2)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1～1.3的浸膏，加入乙醇沉淀，离心得沉淀；

3)将步骤2)所述的沉淀依次用2～4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2～4倍蒸馏水溶解，加入蛋白酶酶解1～3h，灭酶，得到酶解液；

4)将酶解液经分子量为80000～200000的透析袋进行第一次透析24～72h，取保留液经分子量为1500000～2000000的透析袋进行第二次透析24～72h，取第二次渗出液浓缩，乙醇沉淀，离心得到沉淀；

5)将步骤4)所述的沉淀依次用2～4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2～4倍蒸馏水溶解，加入活性炭脱色，过滤，喷雾干燥，即为车前子多糖。

上述步骤2)中，加入90～95v％的乙醇至混合液中醇含量为80～85v％。

上述步骤3)中，所述蛋白酶的加入量为洗涤后的沉淀重量的1～2％。蛋白酶可以将提取物中的大分子蛋白质酶解为多肽和氨基酸。

步骤4)中，酶解液先经截留分子量为80000～200000的透析袋进行第一次透析，小分子色素、多肽和氨基酸和蛋白酶将透过透析袋滤除，大大提高保留液的纯度；而将第一次透析得到的保留液经截留分子量为1500000～2000000的透析袋进行第二次透析，分子量低于1500000～2000000这个范围内的物质将滤出得到透析液。

本发明提取的车前子多糖分子量上限为1500000～2000000，下限为80000～200000，其免疫促进作用远远超出普通车前子多糖。同时，本发明提取的车前子多糖纯度很高，经HPLC检测，纯度高达99.2％以上，颜色为白色。

具体实施方式

以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。

实施例1

1)车前子破碎，加入其20倍重量的水，回流提取2次，每次提取1h，过滤，收集滤液备用；

2)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1的浸膏，加入90v％的乙醇至混合液中醇含量为80v％，离心得沉淀；

3)将步骤2)所述的沉淀依次用2倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2倍蒸馏水溶解，并加入经洗涤后的沉淀重量1％的蛋白酶酶解1h，灭酶，得到酶解液；

4)将酶解液以分子量为80000的透析袋进行第一次透析24h，取保留液以分子量为1500000的透析袋进行第二次透析24h，取第二次渗出液浓缩，乙醇沉淀，离心得到沉淀；