[发明专利]免疫细胞培养方法

权利要求书

1.一种免疫细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

获取DC和CIK；

制备具有3D胶原蛋白细胞培养支架的培养容器；

将DC接种所述培养容器中进行培养，并在DC培养的过程中用诱导活化剂进行诱导培养；

用诱导培养后的DC于所述培养容器中与CIK进行共培养。

2.如权利要求1所述的免疫细胞培养方法，其特征在于，制备所述具有3D胶原蛋白细胞培养支架的培养容器的步骤，包括：

获取胶原蛋白；

将所述胶原蛋白溶解在0.03～0.06mol/L的醋酸溶液中，制成质量分数1～2％的胶原溶液；

将所述胶原溶液冷冻成型，得到胶原块；

将所述胶原块进行真空干燥，得到胶原海绵体；

将所述胶原海绵体于100～110℃下进行真空热交联，得到胶原支架；

将所述胶原支架于培养容器的内壁面上进行粘附固定。

3.如权利要求2所述的将所述胶原溶液冷冻成型步骤中，将所述胶原溶液冷冻成型过程采用于-20～30℃下冷冻1～2h；

和/或，将所述胶原海绵体于100～110℃下进行真空热交联步骤中，所述热交联处理的时间为15～18h。

4.如权利要求2所述的3D免疫细胞培养支架的制备方法，其特征在于，将所述胶原块进行真空干燥步骤中，所述真空干燥为真空升华干燥。

5.如权利要求4所述的3D免疫细胞培养支架的制备方法，其特征在于，所述真空升华干燥过程中干燥时间为36～48h；

和/或，所述真空升华干燥过程中温度为-20～30℃；

和/或，获取所述胶原蛋白步骤中，所述胶原蛋白为I型胶原、II型胶原、III型胶原、XI型胶原、XXIV型胶原和XXVII型胶原中的一种或多种。

6.如权利要求1至5任一项所述的3D免疫细胞培养支架的制备方法，其特征在于，将DC接种所述培养容器中进行培养，并在DC培养的过程中用诱导活化剂进行诱导培养步骤中，

所述诱导活化剂为小细胞肺癌特异性EGFR和铝佐剂相互吸附的混合物。

7.如权利要求6所述的免疫细胞培养方法，其特征在于，所述诱导活化剂中小细胞肺癌特异性EGFR和铝佐剂的质量比为2:1～8:1；

和/或，所述铝佐剂为氢氧化铝、氢氧化铝凝胶、磷酸铝、硫酸铝、铵明矾及钾明矾中的至少一种。

8.如权利要求1至5任一项所述的3D免疫细胞培养支架的制备方法，其特征在于，将DC接种所述培养容器中进行培养，并在DC培养的过程中用诱导活化剂进行诱导培养步骤之后，还包括：

用TNF-α对诱导培养后的DC进行刺激处理。

9.如权利要求1至5任一项所述的3D免疫细胞培养支架的制备方法，其特征在于，将DC接种所述培养容器中进行培养步骤中，采用的培养液为含有60～100IU/ml硫酸庆大霉素、0.5～1.5％PPP、40～60ng/mL的GM-CSF、450～550IU/ml的IL-4的DMEM。