[发明专利]从杜仲叶中提取京尼平的方法

权利要求书

1.从杜仲叶中提取京尼平的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)预湿堆放：将杜仲叶在阴凉处建堆，喷水，待水从堆底部流出后，自然堆放；

2)原料处理：将步骤1)得到的杜仲叶粉碎或破碎，加入相当于原料2-3倍重量的纯净水，加热至50-60℃维持5-10分钟，得到膏状浆液；

3)第一次酶解：将步骤2)得到的膏状浆液，调pH为4-5，加入膏状浆液0.05-0.1％重量份的果胶-纤维素复合酶和0.001重量份的甘露醇进行酶解40-60分钟，得到第一次酶解液；

4)去油：将步骤3)得到的第一次酶解液，加入2-3倍重量的纯净水，加热至60-70℃浸提60-120分钟，得上层浮油液与下层液、渣混合物，分离；

5)第二次酶解：将步骤4)得到的下层液、渣混合物，调pH为4.5，加入相当于混合物0.1-0.2％重量份的纤维素酶进行酶解40-60分钟，得到第二次酶解液，重复两次；

6)柱层析：合并第二次酶解液，过滤，浓缩，通过柱层析，用大孔吸附树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为15-20％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

7)第三次酶解：将步骤6)得到的洗脱液，调pH为4.5，加入β-葡萄糖苷酶进行酶解，酶的用量为洗脱液重量的5-10％，酶的浓度为1mg/ml，酶解温度为50-60℃；

8)柱层析：将步骤7)得到酶解液，通过柱层析，用大孔树脂进行吸附，用去离子水清洗树脂至流出液体为无色，再用浓度为10-20％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

9)干燥：将步骤8)得到的洗脱液浓缩，再通过干燥得到粉末状京尼平。

2.根据权利要求1所述的从杜仲叶中提取京尼平的方法，其特征在于：步骤1)所述的预湿的堆放，为6-12小时。

3.根据权利要求1所述的从杜仲叶中提取京尼平的方法，其特征在于：步骤3)所述的果胶-纤维素复合酶，为活性是1-3万活性单位/克的固态或1-3万活性单位/毫升的液态果胶-纤维复合酶。

4.根据权利要求1所述的从杜仲叶中提取京尼平的方法，其特征在于：步骤6)所述的大孔吸附树脂型号为D101型、DA201型。