[发明专利]肾脏足细胞的制备方法及其专用培养基有效
| 申请号： | 201510544162.6 | 申请日： | 2015-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN105087467B | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 赵春华;张丽娜;李康华 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院基础医学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;A61K35/22;A61P13/12 |
| 代理公司： | 北京戈程知识产权代理有限公司 11314 | 代理人： | 程伟 |
| 地址： | 100005*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肾脏 细胞 制备 方法 及其 专用 培养基 | ||
1.一种将脂肪间充质干细胞诱导为肾脏足细胞的方法，其包括：
1)将脂肪间充质干细胞接种于培养基1中培养2至4天；以及
2)将完成步骤1)的脂肪间充质干细胞转接于培养基2中培养5至7天，以得到肾脏足细胞，
其中所述培养基1由DMEM/F12培养基和溶质组成，所述溶质是：1.9％至2.1％的胎牛血清、9.75ng/mL至10.25ng/mL activin A以及0.95×10-5mol/L至1.05×10-5mol/L维甲酸；
其中所述培养基2由DMEM/F12培养基和溶质组成，所述溶质是：1.9％至2.1％的胎牛血清、9.75ng/mL至10.25ng/mL activin A、0.95×10-7mol/L至1.05×10-7mol/L维甲酸以及19ng/ml至21ng/ml BMP7；
所述肾脏足细胞的Nephrin表达阳性率不低于80％；
所述肾脏足细胞的Podocin表达阳性率不低于80％；
所述肾脏足细胞的WT1表达阳性率不低于80％。
2.根据权利要求1所述的方法，其中：
在所述步骤1)中培养3天，以及在所述步骤2)中培养6天。
3.根据权利要求1所述的方法，其中：
在培养基1中所述溶质是2％的胎牛血清、10ng/mL的activin A和10-5mol/L的维甲酸；以及
在培养基2中所述溶质是2％的胎牛血清、10ng/mL的activin A、10-7mol/L的维甲酸和20ng/ml的BMP7。
4.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤1)中所述脂肪间充质干细胞的浓度为3×105个/ml至6×105个/ml。
5.根据权利要求4所述的方法，其中在步骤1)中所述脂肪间充质干细胞的浓度为5×105个/ml。
6.根据权利要求1所述的方法，所述脂肪间充质干细胞为人脂肪间充质干细胞。
7.根据权利要求6所述的方法，所述脂肪间充质干细胞为人脂肪第三代间充质干细胞。
8.根据权利要求1至7任一项所述的方法，其特征在于：
所述脂肪间充质干细胞的细胞因子CD29、CD44、CD105和Flk-1均为阳性；
所述脂肪间充质干细胞的细胞因子CD31、CD34、CD106和HLA-DR均为阴性。
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