[发明专利]快速检测全血红细胞十八烷三烯酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种快速检测全血红细胞十八烷三烯酸的方法。

背景技术

在人体内，少量脂肪酸以游离形式存在，大部分以结合形式，如甘油三酯、磷脂、糖脂等存在。从营养学角度，脂肪酸可分为必需脂肪酸和非必需脂肪酸，非必需脂肪酸是指机体可以自行合成，不必依靠食物供应的脂肪酸；必需脂肪酸是指人体维持机体正常代谢不可缺少而自身又不能合成或合成速度慢，无法满足机体需要，必须通过食物供给的脂肪酸。必需脂肪酸可分为ω（Omega）-6系列脂肪酸和ω（Omega）-3系列脂肪酸。膳食中必需脂肪酸缺乏将导致皮肤病变、神经和视觉疑难症、心脏疾病等问题。

由于红细胞膜上脂肪酸的组成能够反映人群的长期饮食结构，而不会受到短期内饮食的影响。因此，测定人全血红细胞脂肪酸，能够准确、客观的反映机体内不同脂肪酸的营养水平。

国内外有关脂肪酸检测的相关报道盛多，涉及到食品、环境、医药卫生、临床应用等多个领域，检测方法包括气相色谱法（GC）、气相色谱-质谱法（GC-MS）和液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），检测样本类型更是涉及食物、水质、药品、血液、组织等。但是，不同的应用领域及不同的样品类型，所涉及的样品处理与脂肪酸检测分析流程千差万别，因此不同领域以及不同样品类型的脂肪酸检测方法之间无可比性。

目前，全血红细胞脂肪酸的检测主要有GC、GC-MS和LC-MS/MS三种。GC是目前红细胞脂肪酸检测的常用方法，但是此方法的检测器对未实现色谱分离的类似脂肪酸，无法实现准确定性分离和定量分析，因此无法对多种脂肪酸特异性、准确的定性和定量分析。LC-MS/MS方法前处理较为复杂，且分析结果重现性较差。而GC-MS方法由于同时具有气相的分离功能和质谱的特异性定性、定量功能，所以可以解决GC和LC-MS/MS的弊端，但是现有的GC-MS方法分析时间较长，检测通量较低。

中国专利201210247480.2公开了一种气相色谱-质谱联用检测脂肪酸含量的方法，该方法针对的样品为动物组织，样品的前处理包括皂化步骤，还需要充氮气保护，样品的前处理复杂。

因此，本领域技术人员迫切需要一种前处理简单、检测快速、方法灵敏度高、特异性强的适用于全血红细胞脂肪酸的检测方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种快速检测全血红细胞十八烷三烯酸的方法，该方法的样品用量少，前处理简单，灵敏度高，特异性强，定性、定量功能强大，并且整个检测过程时间短、检测通量高。本发明仅涉及全血样本红细胞十八烷三烯酸的检测。

一种快速检测全血红细胞十八烷三烯酸的方法，包括如下步骤：

A）全血样品的前处理：从全血样品中分离红细胞，加入内标溶液和盐酸-甲醇溶液进行衍生化反应，然后加入萃取剂萃取，取上清液并氮气吹干，残渣中加入复溶剂，混匀，得到样品检测液；

B）对所述样品检测液采用气相色谱-质谱仪进行检测，气相色谱条件包括：色谱柱采用极性色谱柱，载气为氦气，不分流进样，线速度流量控制方式，载气流量为0.80~1.00mL/min，起始柱温60℃，先升温至180℃，然后升温至220℃，整个升温程序的梯度时间为8~15min；质谱条件为：采用电子轰击离子源，采用全扫描和选择离子扫描方式。

采用上述技术方案，前处理简单，通过萃取-吹干-复溶的过程，有效去除了干扰物质，使红细胞中的十八烷三烯酸转化为挥发性较强、适用于气相色谱质谱仪检测的十八烷三烯酸甲酯产物；检测方法的灵敏度高，特异性强，定性、定量功能强大，准确性好，并且整个检测过程时间短、检测通量高。

优选地，所述内标溶液选自十七烷酸。除十七烷酸，外本发明还可以选用十五烷酸或十九烷酸作为内标溶液。

优选地，所述萃取剂选自正己烷，所述复溶剂选自正己烷。使用正己烷作为萃取剂，可以将各种脂肪酸的甲酯化产物萃取出来，萃取效率高且有效避免了其他物质的干扰。

优选地，所述内标溶液与红细胞的体积比为1：(1~2)；所述红细胞、盐酸-甲醇溶液、萃取剂及复溶剂的体积比为1：(10~25)：(20~50)：(4~10)。

优选地，所述红细胞、盐酸-甲醇溶液、萃取剂及复溶剂的体积比为1：20：40：8。

优选地，所述极性色谱柱选自规格为20m*0.18mm*0.20μm的极性毛细管色谱柱。