[发明专利]一种EGFR抗体可变区及其应用

说明书

本发明公开了一种EGFR抗体可变区及其应用，所述抗体包括轻链和重链，其中轻链可变区氨基酸序列见SEQ ID NO.1，重链可变区氨基酸序列见SEQ ID NO.2，本发明通过酶联免疫实验证实了所述抗体能够与EGFR特异性的结合。本发明所述的抗体能够有效检测EGFR，对其检测的灵敏度达0.13ng/ml。本发明所述的抗体能够用于制备检测EGFR的试剂盒和治疗相关疾病的药物。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体而言涉及一种EGFR的单克隆抗体，本发明还涉及所述抗体的制备方法与其在制备检测EGFR试剂盒中的应用。

背景技术

EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor)是上皮生长因子(EGF)细胞增殖和信号传导的受体。EGFR是一种糖蛋白，属于酪氨酸激酶型受体，细胞膜贯通，分子量170KDa。EGFR位于细胞膜表面，靠与配体结合来激活，包括EGF和TGFα(transforming growthfactorα)。激活后，EGFR由单体转化为二聚体。EGFR属于ErbB受体家族的一种，该家族包括EGFR(ErbB-1)，HER2/c-neu(ErbB-2)，Her 3(ErbB-3)和Her 4(ErbB-4)。EGFR二聚后可以激活它位于细胞内的激酶通路，包括Y992,Y1045,Y1068,Y1148and Y1173等激活位点。这个自磷酸化可以引导下游的磷酸化，包括MPAK，Akt和JNK通路，诱导细胞增殖。

EGFR也被称作HER1、ErbB1，突变或过表达一般会引发肿瘤。研究表明在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达。EGFR与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。EGFR的过表达在恶性肿瘤的演进中起重要作用，胶质细胞瘤、肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等组织中都有EGFR的过表达。EGFR的高表达主不仅涉及其基因过多扩增，还存在于翻译及翻译后。EGFR在肿瘤中的高表达还可能与活化后降解减少有关，一些研究指出c-Src可通过抑制受体泛素化和内吞作用而上调EGFR水平。

单克隆抗体由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。单克隆抗体除了用于制备特异性的治疗药物，此外由于其与物质结合是特异的，所以单克隆抗体还广泛可用于检测试剂的制备。

鉴于此，本领域需要一种准确检测EGFR表达水平的试剂，用于各类与EGFR高表达的疾病的诊断。为解决上述问题本发明人通过杂交瘤技术筛选到了特异性强、灵敏度高的EGFR抗体。

发明内容

由于EGFR在众多肿瘤疾病中高表达，为此开发一种能准确检测EGFR表达水平的试剂，对于用于各类与EGFR高表达的疾病的诊断具有重要的临床意义。为此本发明通过杂交瘤技术筛选出了多株与EGFR特异性结合的单克隆抗体，其中编号为YL06的抗体株结合效果最好。

本发明公开了一种抗人EGFR的单克隆抗体YL06，所述单克隆抗体包括轻链和重链，其氨基酸可变区序列分别如序列表中SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示。

本发明所述的单克隆抗体YL06的轻链蛋白质分子可变区的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列，分别如序列表中SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5所示。所述单克隆抗体的重链蛋白质分子可变区的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如序列表中SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8所示。

本发明还公开了上述单克隆抗体YL06的制备方法，主要包括如下：

1.抗人EGFR单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建