[发明专利]从广金钱草中提取总黄酮提取物的方法和测定广金钱草中有效成分含量的方法

说明书

本发明提供了一种使用单一对照品夏佛塔苷，同时测定广金钱草药材、广金钱草总黄酮提取物及其制剂中Vicenin‑1、Vicenin‑3和夏佛塔苷含量的方法，该方法以广金钱草总黄酮提取物或制剂中有效活性成分且含量较高、易得的夏佛塔苷作为内标物，计算夏佛塔苷与Vicenin‑1、Vicenin‑3的相对校正因子，将其作为常数，可同时测定广金钱草总黄酮提取物或制剂中Vicenin‑1、Vicenin‑3和夏佛塔苷的含量，实现科学、灵敏、快速地监控工业生产中广金钱草总黄酮提取物或制剂中的质量，同时克服了对照品短缺这一问题。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体的，本发明涉及一种从广金钱草中提取总黄酮提取物的方法和一种测定广金钱草中有效成分含量的方法。

背景技术

广金钱草为豆科山蚂蝗属植物Desmodium styracifolium(Osbeck)Merr.，其药用部位为干燥地上部分，主要化学成分为黄酮、皂苷、多糖、生物碱等化合物。具有清热除湿，利尿通淋之功效。用于热淋、沙淋、石淋、小便涩痛、水肿尿少、黄疸尿赤、尿路结石。

夏佛塔苷、Vicenin-1和Vicenin-3为广金钱草中的有效成分，均属于黄酮碳苷类化合物，并且这三种成分含量较高。为了控制广金钱草药材、广金钱草总黄酮提取物及其制剂的质量，需要测定这三种成分的含量。

然而，用于检测广金钱草药材、广金钱草总黄酮提取物及其制剂中多种有效成分夏佛塔苷、Vicenin-1和Vicenin-3含量的方法仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中的问题至少之一。

本发明是基于发明人的以下发现而完成的：

现有技术中，采用色谱法测定广金钱草提取物中各组分的含量，往往需要相应的高纯度标准品作对照，由于中药化学对照品分离难度大或单体不稳定难以供应或供应价格高等因素，致使高纯度的标准品不易获得或获得的成本较高，实际生产中难以大规模实施。本发明的发明人通过超高效液相色谱-二极管阵列检测器-质谱联用技术(UPLC-DAD-MS)对广金钱草总黄酮提取物进行色谱分离，并对各化合物进行峰归属及纯度分析，最终选择对夏佛塔苷、Vicenin-1和Vicenin-3三个成分进行含量测定。其中夏佛塔苷对照品可从中检院获取，另外两者为自制获得，且因为夏佛塔苷、Vicenin-1和Vicenin-3为广金钱草中的有效成分，并且这三种成分含量较高、分离度较好，故最终确定以夏佛塔苷对照品为对照，采用“一测多评”(QAMS)法对夏佛塔苷、Vicenin-1和Vicenin-3三个成分进行含量测定。

需要说明的是，高效液相色谱“一测多评”技术，是以夏佛塔苷为内标物，确立其与Vicenin-1和Vicenin-3的相对校正因子、相对保留时间，从而实现用夏佛塔苷一种易得的对照品同时测定广金钱草药材中夏佛塔苷、Vicenin-1和Vicenin-3的含量，从而实现控制广金钱草药材、广金钱草总黄酮提取物及其制剂的药品质量的目的。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种从广金钱草中提取总黄酮提取物的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将广金钱草样品与乙醇混合，并通过回流或超声方法进行提取，以便获得总黄酮提取物，其中，所述乙醇的浓度为25～90％，所述广金钱草的重量与所述乙醇的体积比为25mg：25～100ml，优选25mg：50ml。通过上述提取方法，既可以确保完全提取广金钱草中的总黄酮，提取效率高，又可以使得后期液相色谱分析中峰的分离度良好。

根据本发明的实施例，上述从广金钱草中提取总黄酮提取物的方法可以进一步包括下列附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，上述方法采用超声方法进行提取10～40分钟，优选20分钟。通过上述超声提取方法，既节约了提取时间，又确保了完全提取广金钱草中的总黄酮，使得提取效率高，利于黄酮的药用和液相色谱分析。