[发明专利]一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法

权利要求书

1.一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤a：通过诱使细胞团聚；所述步骤a诱使细胞团聚采取的方法，是指在明胶包被的培养板上进行悬浮培养，从而使细胞团聚；

步骤b：应用MET激动剂激活处理细胞团，高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化，

所述干细胞为脂肪间充质 干细胞，脐带血间充质干细胞或脐带间充质干细胞中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述的一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法，其特征在于，所述的MET激动剂是指各种可以激活MET蛋白的分子，包括HGF，活性肽，化学分子或基因工程蛋白质分子中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）脐带血间充质干细胞培养于2%明胶包被的培养板，在含有20%胎牛血清的DMEM悬浮培养7天后，细胞球平均直径达100微米时即开始诱导；

2）细胞用PBS清洗两次，使用培养基I培养24小时；

3）24小时后，PBS清洗细胞，并更换为培养基II，继续培养48小时；

4）48小时后，PBS清洗细胞，并更换为培养基III，继续培养48小时；

5）48小时后，PBS清洗细胞，并更换为培养基IV，继续培养24小时；

6）经ELISA免疫定量测定；

7）对7周龄小鼠腹腔注射160 mg/kg链脲霉素来诱导产生糖尿病；

8）血糖浓度达到16.7 mmol/L时, 每只小鼠腹腔肝内注射2.5×10⁶胰岛β样细胞之后每两周检测血糖浓度。

4.根据权利要求3所述的一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法，其特征在于，所述培养基I的成分为：DMEM/F12、1mM丁酸钠和50ng/mL 激活素A。

5.根据权利要求3所述的一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法，其特征在于，所述培养基II的成分为：DMEM/F12、0.1-0.2% 胎牛血清和50ng/mL Activin A。

6.根据权利要求3所述的一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法，其特征在于，所述培养基III的成分为：DMEM/F12、50ng/mL KGF/FGF、10ng/mL RA、10ng/mL HGF和1%胎牛血清。

7.根据权利要求3所述的一种高效诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的方法，其特征在于，所述培养基IV的成分为：DMEM/F12、10ng/mL HGF、1% B27和2%胎牛血清。