[发明专利]大豆主要过敏原Gly m Bd 28K的IgG结合表位

说明书

本发明涉及大豆主要过敏原Gly m Bd 28K的三个IgG结合表位，氨基酸序列分别为²⁸H‑Gly‑Asp‑Lys‑Lys‑Ser‑Pro‑Lys‑Ser‑Leu‑Phe‑Leu‑Met‑Ser‑Asn‑Ser‑OH⁴²；⁵⁶H‑Leu‑Lys‑Ser‑His‑Gly‑Gly‑Arg‑Ile‑Phe‑Tyr‑Arg‑His‑Met‑His‑Ile‑OH⁷⁰；¹⁵⁴H‑Glu‑Thr‑Phe‑Gln‑Ser‑Phe‑Tyr‑Ile‑Gly‑Gly‑Gly‑Ala‑Asn‑Ser‑His‑OH¹⁶⁸。本发明以化学合成多肽⁵⁶H‑Leu‑Lys‑Ser‑His‑Gly‑Gly‑Arg‑Ile‑Phe‑Tyr‑Arg‑His‑Met‑His‑Ile‑OH⁷⁰抑制Gly m Bd 28K天然蛋白结合Gly m Bd 28K单克隆抗体(mAb3F5)，表明该线性表位多肽对Gly m Bd 28K天然蛋白亲和Gly m Bd 28K单克隆抗体(mAb3F5)显现出良好的抑制功效。本发明对于探明食物过敏产生的分子机制，了解过敏原在食物过敏反应中的作用，开展无过敏和低过敏食品研究，研究过敏性疾病的发生具有重大意义。

技术领域

本发明涉及分子生物学、免疫学、生物信息学领域，特别是涉及大豆主要过敏原Gly m Bd28K蛋白的IgG结合表位。

背景技术

大豆蛋白作为主要的植物蛋白资源之一，富含人体所必需的氨基酸，且不含胆固醇，具有很高的营养价值，但是有少部分人却不能从中获益，因为他们对大豆及其制品过敏，通常的症状为起疹子、皮肤发痒、腹泻。有调查显示，大约1％～6％的婴儿受到大豆过敏的影响，且随着豆制品消费量的增加，成年人大豆过敏的发病率不断上升。

过敏原表位是引发食物过敏反应的免疫学物质基础，表位通常位于分子表面，大小相当于抗体的结合部位，一般由5-7个氨基酸、单糖或核苷酸组成。根据过敏原表位结合现象的不同，表位又有不同的称谓，与抗体结合的称为B细胞表位，其中包括IgE结合表位和IgG结合表位，被Tc细胞、Th细胞、NK细胞识别的分别由称为Tc细胞表位、Th细胞表位、NK细胞表位；根据表位结构的不同，又可分为不连续过敏原表位(构象型表位)和连续性过敏原表位(线性表位)。

过敏反应是一种复杂的变态反应疾病，受各种因素的影响，其中IgE、IgG抗体在过敏反应中均发挥着重要作用。IgE抗体为致敏性抗体已得到公认，而IgG抗体在过敏反应中的作用也相当关键。根据免疫学变态反应的机理，变态反应包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个类型，从理论而言，食物过敏都可能涉及这些机理，而且在食物过敏中可能同时存在。在过敏反应中，特异性IgG抗体参与了四种过敏类型的前三种：Ⅰ、Ⅱ以及Ⅲ型，由此可见IgG抗体在过敏反应中的重要作用。但是，关于大豆蛋白是如何致敏，大豆蛋白哪一部分与IgG抗体结合，大豆蛋白与IgG抗体结合的结构和氨基酸组成有何特点等的相关报道甚少。

目前，普遍认为大豆中的主要过敏蛋白是Gly m Bd 30k(P34)、Gly m Bd 28k和β-伴球蛋白的α亚基，其中Gly m Bd 30k能被65％的大豆过敏病人血清识别，是大豆中致敏性最强的蛋白。Gly m Bd 28K是大豆中致敏性仅次于Gly m Bd 30K的蛋白，Gly m Bd 28K属于Cupin蛋白家族，有一个普通的β-桶形结构。免疫筛选大豆种子成熟中期cDNA文库得到了该蛋白的全长cDNA。该cDNA克隆全长1567bp，含一个1419bp的开放阅读框和148bp的3’-非翻译区域，带有多聚腺苷酸尾巴。cDNA开放阅读框编码一个含473个氨基酸的多肽，其中包括N末端21个氨基酸的端信号肽，随后的多肽部分在加工成熟过程中被剪切成两个完整的蛋白，含220个氨基酸残基的28K和含232个氨基酸残基的23K，23K蛋白被进一步证实为新的过敏原。