[发明专利]一种提高豆粨降解效率的方法

说明书

本发明的目的是提供一种提高豆粨降解效率的方法，有效的提供豆粨的酶解效率。为了提高碱性蛋白酶对豆粨的降解效率，提供一种能高效降解豆粨为多肽的碱性蛋白酶，该碱性蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:4，其一种编码基因的序列为SEQ ID NO:3。本发明使用优化后的碱性蛋白酶来制备重组枯草芽孢杆菌，从而再更短的时间内对豆粨发酵完全，从而有效的提高了发酵效率，节省了成本。

技术领域

本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种提高豆粨降解效率的方法。

背景技术

豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品，是棉籽粕、花生粕、菜籽粕等动植物油粕饲料产品中产量最大，用途最广的一种。作为一种高蛋白质，豆粕是制作牲畜与家禽饲料的主要原料，大约85％的豆粕被用于家禽、水产养殖动物的饲料。

但消化酶系统尚未发育完全的幼畜(特别是对于早期断奶的动物)会对豆粨中存在的抗营养因子产生过敏反应，对以豆粨作为植物蛋白来源的饲料消化能力较弱。而营养拮抗因子的存在也是影响大豆蛋白源在饲料中使用的主要因素。而大豆肽中富含许多小肽，能直接被动物吸收，而且大豆肽抗原性较低，幼畜使用后发生过敏反应的概率大大降低。研究表明在早期断奶子猪饲料中添加大豆肽作为血浆蛋白粉的替代品，其日均增质量率、饵料系数、特定生长率等无显着性差异。但目前使豆粕降解为易吸收的小肽的过程中还存在水解效率较低的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高豆粨降解效率的方法，有效的提供豆粨的酶解效率。

为了提高碱性蛋白酶对豆粨的降解效率(以水解度作为评价标准)，申请人对碱性蛋白酶的序列进行改造，获得了能高效降解豆粨为多肽的碱性蛋白酶，该碱性蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:4，其一种编码基因的序列为SEQ ID NO:3。

本发明还提供一种重组的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，是将携带有上述编码基因的重组质粒转化后制备的；

另一方面，申请人用该重组的枯草芽孢杆菌来发酵豆粨。

本发明使用优化后的碱性蛋白酶来制备重组枯草芽孢杆菌，从而再更短的时间内对豆粨发酵完全，从而有效的提高了发酵效率，节省了成本。

具体实施方式

本发明所述的蛋白水解度(Degree of hydrolysis,DH)是指蛋白质中的肽键被水解的百分数，其计算公式如下：

DH％＝h/h_totx100％

h是蛋白质水解后每克蛋白中被裂解的肽键的毫摩尔数(mmlo/g蛋白质)、

h_tot，以酪蛋白为标准，其值为8.2mmlo/g蛋白质；

当蛋白质的肽键全部被水解生成游离的氨基酸时，则水解度为100％；没有被水解时，其水解度为0。由于蛋白质水解时每裂解一个肽键就新生成一个-NH₂和一个-COOH基，因此，在测定蛋白质的水解度时，只要定量的测定新生成的的-NH₂和-COOH基量就可以计算h值；这样就可以算出蛋白质的水解度来。

本发明采用甲醛固定法来测定h值(中华人民共和国国家标准甲醛值法GB12143.2-89)。

下面结合实例对本发明的方法做进一步说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常可按常规条件，如J.萨姆布鲁克(Sambrook)等编写的《分子克隆实验指南》中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件运行。

实施例1碱性蛋白酶的优化

1、利用易错PCR的技术在体外向核苷酸序列为SEQ ID NO:1的碱性蛋白酶基因(编码的成熟肽氨基酸序列为SEQ ID NO:2)中引入核苷酸突变，易错PCR的体系如下：