[发明专利]病毒诱导的石竹八氢番茄红素脱氢酶基因高效沉默体系

权利要求书

1.病毒诱导的石竹八氢番茄红素脱氢酶基因高效沉默方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、采用八氢番茄红素脱氢酶PDS的编码基因序列设计特异引物；

S2、从石竹中克隆PDS基因，通过RT-PCR在石竹中扩增出如SEQ ID NO：1所示的PDS基因片段，并将片段连接到pGEM T-easy载体上；

S3、将连接到载体pGEM T-easy上的PDS片段用酶切后连接到采用同样酶切后的TRV2载体上；

S4、将步骤S3所得的含上述PDS基因片段的pTRV2重组载体转入GV3101农杆菌中，进行阳性克隆的PCR鉴定；

S5、室温下将含有重组质粒的农杆菌在渗透缓冲液MES+MgCl₂+Aceto中活化4h后，采用浓度为1OOμmol L^-1的乙酰丁香酮对4叶期的石竹幼苗室温下进行高压侵染，待叶片出现水渍状时，表明侵染完成；

S6、将侵染后的石竹幼苗先放在15℃下预培养2d后，10℃下继续预培养5d；

S7、然后步骤S6处理后的石竹幼苗放在20℃，光照为4000LUX的培养箱中进行培养，15-20d后，出现叶片漂白现象。

2.根据权利要求1所述的病毒诱导的石竹八氢番茄红素脱氢酶基因高效沉默方法，其特征在于，所述步骤S5中高压侵染的压力为0.08MPa。