[发明专利]一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法。

背景技术

合柱金莲木，拉丁学名为Sauvagesiarhodoleuca(Diels)M.C.E.，又名辛木，属金莲木科(Ochnaceae)落叶小灌木，为我国特有的单种属植物。合柱金莲木以根茎入药，具有止痒杀虫等功效。由于合柱金莲木形态特征与南美洲产的Wallacea属植物很接近，因此，它的存在对于进一步研究本科植物的区系、地理分布及其发生与演化等具有重要的科学意义。

合柱金莲木主要分布于广西金秀、龙胜、融水、德保和广东的封开、连山、怀集等地。常生长在海拔200-1000m的中、低山区，呈片状生于密林或疏林下。由于森林砍伐，生境破坏和挖取根茎入药，致使植株日趋减少，有面临绝灭的危险，因此于1999年被列入《国家重点保护野生植物名录(第1批)》中，为国家一级重点保护野生植物。在自然条件下，合柱金莲木主要依靠种子进行繁育，但种子微小，且果实成熟后即开裂散落的特性常造成种子产量低，生产上难以实现大面积栽培。

发明内容

本发明的目的是提供一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法，能够有效快速地提高合柱金莲木种苗的繁殖速度和质量，实现合柱金莲木优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种合柱金莲木组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：选取合柱金莲木种子作为外植体，依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；

(2)种子萌发获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养20天，种子发芽后获得无菌试管苗，所述MS培养基中添加1.5mg/L灵发素LFS、0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，所述MS繁殖培养基中添加1.0-2.0mg/L灵发素LFS、0.5-1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭，培养基的pH值为5.8；

(4)丛生芽壮苗培养：将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天得到健壮植株，所述MS壮苗培养基中添加1.0mg/L灵发素LFS、1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭，培养基的pH值为5.8；

(5)健壮植株生根培养：将步骤(4)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养25天得到带根的完整植株，所述1/2MS生根培养基中添加0.1-1.0mg/L灵发素LFS、0.5-2.0mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-0.3mg/L的ABT1号生根粉、30g/L蔗糖、4.5g/L的琼脂和1g/L的活性炭，培养基的pH值为5.8；

(6)炼苗与移栽：步骤(5)获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽到细河沙：泥炭土＝1:2的苗床中，在苗床中生长一个月后移栽大田，移栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次10min，此后每天早8点、晚6点各喷雾1次，每次10min；移栽时的温度条件为20-25℃，相对湿度75-90％，遮阳率为60-80％。

本发明的突出优点在于：