[发明专利]一种特异性的分子标记在鉴定雪山草鸡中的应用以及鉴定雪山草鸡的试剂盒和鉴定的方法

权利要求书

1.一种特异性的分子标记在鉴定雪山草鸡中的应用，其特征在于：所述分子标记包括如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

所述分子标记来源于雪山草鸡的16号染色体BRD2基因的3’UTR区域；

扩增所述分子标记的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；扩增所述分子标记的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

2.一种鉴定雪山草鸡的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)以包括SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列作为模板，用如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列作为上游引物，如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列作为下游引物进行PCR扩增；

2)以待鉴定鸡种的DNA作为模板，用如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列作为上游引物，如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列作为下游引物进行PCR扩增；

3)将步骤1)和步骤2)中PCR扩增得到的两种扩增产物分别通过琼脂糖凝胶电泳进行检测并进行对比；

4)如两种扩增产物相同，则待鉴定鸡种即为雪山草鸡；如两种扩增产物不同，则待鉴定鸡种为非雪山草鸡。

3.根据权利要求2所述的一种鉴定雪山草鸡的方法，其特征在于：所述步骤1)和步骤2)中PCR扩增反应体系的总体积为20μL：1μL浓度为100ng/μL的DNA模板，2μL 10×PCRBuffer，1.5μL浓度为10m mol/L的dNTP，浓度为10p mol/μL的上、下游引物各1μL，0.2μL浓度为5U/μL的Taq酶，ddH₂O 13.3μL。

4.根据权利要求2所述的一种鉴定雪山草鸡的方法，其特征在于：所述步骤1)和步骤2)中PCR扩增程序为：95℃预变性5min；94℃变性40s，64.6℃退火40s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸10min，4℃保存备用。

5.根据权利要求2所述的一种鉴定雪山草鸡的方法，其特征在于：所述步骤3)所用琼脂糖凝胶电泳为：将PCR扩增得到的两种扩增产物用2％浓度的琼脂糖凝胶在电压为100V的条件下，电泳40min，分子量为50-500bp的DNA Marker作参照。