[发明专利]丝胶蛋白包裹的丝胶/介孔硅复合型载药纳米颗粒的制备方法

权利要求书

1.丝胶蛋白包裹的具有pH/蛋白酶双重响应的丝胶/介孔硅复合型载药纳米颗粒的制备方法，其包括以下步骤：

（1）称取蚕茧，用高温碱提法提取丝胶蛋白，溶解后的丝胶液再经过3500 Da的透析袋透析、冻干即得到纯丝胶蛋白固体；其中所述的高温碱提法是将剪碎后的蚕茧浸没在0.01-0.05M的碳酸钠溶液中，100摄氏度溶解30-60分钟；

（2）利用溶胶凝胶及表面活性剂模板法制备介孔硅纳米颗粒；

（3）将步骤（2）中所得介孔硅纳米颗粒分散于甲醇中，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，反应得到表面氨基化的介孔硅纳米颗粒；

（4）将步骤（3）中的表面氨基化的介孔硅纳米颗粒置于甲醇和盐酸的混合液中回流洗脱模板，洗脱模板后离心即得到具有规则孔道的氨基化介孔硅纳米颗粒；

（5）将步骤（4）中的具有规则孔道的氨基化介孔硅纳米颗粒分散于浓度为2.5wt%的戊二醛水溶液中，室温避光搅拌24小时，而后离心收集产物，然后用双蒸水清洗多次后，得到醛基化的介孔硅纳米颗粒；其中氨基化介孔硅纳米颗粒与戊二醛水溶液的质量体积比为100 mg : 10 mL；

（6）将步骤（4）中所得的氨基化介孔硅纳米颗粒或步骤（5）中所得的醛基化介孔硅纳米颗粒与药物混合反应，得到负载药物的氨基化或者醛基化介孔硅纳米颗粒；

（7）通过负载药物的醛基化介孔硅纳米颗粒中表面的醛基与步骤（1）得到的纯丝胶蛋白上的氨基反应，或直接利用静电作用将丝胶蛋白包裹在氨基化介孔硅纳米颗粒表面，即得到丝胶蛋白包裹的具有pH/蛋白酶双重响应的丝胶/介孔硅复合型载药纳米颗粒；其中所述通过负载药物的醛基化介孔硅纳米颗粒中表面的醛基与步骤（1）得到的纯丝胶蛋白上的氨基反应的具体步骤如下：将步骤（1）得到的纯丝胶蛋白固体加水制备成5 - 10 mg/mL丝胶蛋白水溶液，将丝胶蛋白水溶液加入步骤（6）所得的负载药物的醛基化介孔硅纳米颗粒中，避光35摄氏度搅拌6-7小时；而后离心收集产物；然后用双蒸水冲洗产物，置于冷冻真空干燥机中冻干即获得粉末状的纳米颗粒，其中介孔硅纳米粒与纯丝胶蛋白的质量比为1 : 0.5 – 1 : 2。

2.丝胶蛋白包裹的具有还原/蛋白酶双响应的丝胶/介孔硅复合型载药纳米颗粒的制备方法，其包括以下步骤：

（1）称取蚕茧，用高温碱提法提取丝胶蛋白，溶解后的丝胶液再经过3500 Da的透析袋透析、冻干即得到纯丝胶蛋白固体；其中所述的高温碱提法是将剪碎后的蚕茧浸没在0.01-0.05M的碳酸钠溶液中，100摄氏度溶解30-60分钟；

（2）利用溶胶凝胶及表面活性剂模板法制备介孔硅纳米颗粒；

（3）将步骤（2）中所得介孔硅纳米颗粒根据质量体积比1 g : 83 mL分散于甲醇中，加入巯丙基三甲氧基硅烷，即得到巯基化的介孔硅纳米颗粒；其中甲醇与巯丙基三甲氧基硅烷的体积比为36 : 1；

（4）将步骤（3）中的200 mg巯基化的介孔硅纳米颗粒分散于30 mL甲醇中，加入200 mg（2-氨基乙巯基）-2-巯基吡啶，室温搅拌24小时后，离心收集产物，用甲醇和双蒸水清洗数次后冻干，得到双硫化的介孔硅纳米颗粒；

（5）将步骤（4）中的双硫化介孔硅纳米颗粒置于甲醇和盐酸的混合液中回流，洗脱模板后即得到具有规则孔道的双硫化介孔硅纳米颗粒；

（6）将步骤（5）得到的具有规则孔道的双硫化介孔硅纳米颗粒与药物混合反应，即可得到负载药物的双硫化介孔硅纳米颗粒；

（7）将步骤（6）得到的负载药物的双硫化介孔硅纳米颗粒表面的氨基与步骤（1）得到的纯丝胶蛋白上的羧基反应，使得丝胶蛋白包裹于介孔硅纳米粒表面，即得到丝胶蛋白包裹的具有还原/蛋白酶双响应的丝胶/介孔硅复合型载药纳米颗粒；所述将负载药物的双硫化介孔硅纳米颗粒表面的氨基与步骤（1）得到的纯丝胶蛋白上的羧基反应具体步骤如下：将步骤（1）得到的纯丝胶蛋白固体加水制备成5 - 10 mg/mL丝胶蛋白水溶液，依次加入1-​(3-​二甲氨基丙基)​-​3-​乙基碳二亚胺盐酸盐，N-羟基丁二酰亚胺，室温反应2-3小时后，将该溶液加入步骤（6）所得的负载药物的双硫化介孔硅纳米颗粒中，避光35摄氏度反应6 - 24小时；而后离心收集产物；然后用双蒸水冲洗产物，置于冷冻真空干燥机中冻干即获得粉末状的天然丝胶蛋白包裹的具有还原/蛋白酶双响应的丝胶/介孔硅复合型载药纳米颗粒；丝胶蛋白与1-​(3-​二甲氨基丙基)​-​3-​乙基碳二亚胺盐酸盐的质量比为1 : 6，丝胶蛋白与N-羟基丁二酰亚胺的质量比为1 : 3，介孔硅纳米粒与纯丝胶蛋白的质量比为2 : 1。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述药物为抗癌药物、激素或抗生素。