[发明专利]一种结球甘蓝发育膨大小孢子分离的方法

权利要求书

1.一种结球甘蓝发育膨大小孢子分离的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1，取结球甘蓝花序，选取花蕾进行灭菌；

步骤2，在步骤1所得灭菌后的花蕾中加入NLN-13液体诱导培养基，研磨、过滤，滤液离心后取沉淀，再加入NLN-13液体培养基，得小孢子悬浮液；

步骤3，将步骤2所得小孢子悬浮液在避光条件下经热激处理后进行培养；

步骤4，将步骤3所得培养液依次经300～350目、450～600目滤网过滤，得发育膨大的小孢子。

2.根据权利要求1所述的结球甘蓝发育膨大小孢子分离的方法，其特征在于：步骤1中所述花蕾处于单核晚期至双核早期，花瓣和花药长度比为0.8～1.2。

3.根据权利要求1所述的结球甘蓝发育膨大小孢子分离的方法，其特征在于：步骤2中NLN-13培养基由NLN液体培养基1L和蔗糖130g组成，pH6.0～6.2。

4.根据权利要求1所述的结球甘蓝发育膨大小孢子分离的方法，其特征在于：步骤3中热激处理条件为32℃～33℃、时间为1d～3d。

5.根据权利要求1所述的结球甘蓝发育膨大小孢子分离的方法，其特征在于：步骤3中培养条件为25±2℃、时间为1d～10d。

6.根据权利要求1所述的结球甘蓝发育膨大小孢子分离的方法，其特征在于：步骤4中所述培养液是指在20倍显微镜下随机观察10个视野，统计发育小孢子数量须占全部小孢子的比例超过5%。

7.根据权利要求1所述的结球甘蓝发育膨大小孢子分离的方法，其特征在于：步骤4中过滤过程采用真空抽滤，所用真空度为20-60kpa。