[发明专利]一种电子烟烟液中烟草特有N-亚硝胺的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于电子烟的理化检验技术领域，具体说是一种采用液液萃取-凝胶渗透色谱-气相色谱-串联质谱测定电子烟烟液中烟草特有N-亚硝胺含量的方法。

背景技术

N-亚硝基降烟碱（NNN）、N-亚硝基新烟草碱（NAT）、N-亚硝基假木贼碱（NAB）和4-（亚硝基甲氨基）-1-β-吡啶基-1-丁酮（NNK）是卷烟烟气中普遍存在的致癌物，由于这些N-亚硝胺只存在于卷烟烟气或其他烟草制品中，所以被称为烟草特有N-亚硝胺。早在1962年，国际上就有文章报道烟草中含有N-亚硝胺及其潜在的致癌性。目前，烟草特有N-亚硝胺被国际癌症研究协会列为致癌和可以致癌物黑名单。因此，测定烟草特有N-亚硝胺的含量对正确评价吸烟对健康的危害具有重要意义。然而，烟草特有N-亚硝胺在烟气及其它烟草制品中的含量很低（通常为ng级别）、且其它共存组分复杂，因此要对烟草特有N-亚硝胺进行准确定量分析，通常需要一定的样品前处理过程，以达到去除共存基质干扰和富集烟草特有N-亚硝胺的目的。

电子烟（electricalcigarette,e-cigarette）是一种外形模仿卷烟的电子产品，其通过雾化含烟碱的烟液而让使用者在吸食时产生一种类似抽烟的感觉。近年来，随着国内外对传统卷烟的管控措施不断加强，电子烟取得了十足的发展，并且在国内外的产销量都大幅增加。然而，迄今为止，国内外均没有系统的电子烟安全性评估资料，且其安全性尚未得到充分的科学论证。因此，准确测定电子烟烟液中的成分显得尤为重要。目前已经有资料显示电子烟烟液中含有烟草特有N-亚硝胺，但是测定其含量时也会遇到含量低和基质复杂的问题。

前期有文献报道将电子烟烟液用100mM乙酸铵溶液稀释后直接引入液相色谱-串联质谱进行测定;对于卷烟主流烟气中的烟草特有N-亚硝胺,目前的测定方法是使用玻璃纤维滤片捕集卷烟主流烟气中的总粒相物，用乙酸铵溶液超声萃取，萃取液经微孔滤膜过滤后，采用内标法使用高效液相色谱-串联质谱联用仪进行定量分析。以上测定方法虽然简单，但是在检测灵敏度和去除基质干扰方面都有待改进，所以对某些烟草特有N-亚硝胺含量低的样品并不能实现准确检测。因此，开发一种灵敏度高、基质去除效果好、抗干扰能力强的电子烟烟液中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，对正确评估电子烟的安全性等具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的主要是为了克服现有检测技术的缺陷，建立一种灵敏准确、基质去除效果好、抗干扰能力强的电子烟烟液中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，该方法能够对电子烟烟液中含量极低的烟草特有N-亚硝胺实现准确定量，且具有基质去除效果好、抗干扰能力强的优点。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种电子烟烟液中四种烟草特有N-亚硝胺（NNN、NAT、NAB和NNK）的测定方法，具体包括以下工艺步骤：

a、标准工作溶液的配制：由于烟草特有N-亚硝胺在乙酸乙酯和丙酮的混合溶液中溶解性较好，且乙酸乙酯为本方法的流动相之一，因此本专利申请以乙酸乙酯/丙酮（1/1,v/v）为溶剂配制标准工作溶液。首先以乙酸乙酯/丙酮（1/1,v/v）为溶剂，以四种烟草特有N-亚硝胺的同位素（NNN-d4、NAT-d4、NAB-d4和NNK-d4）标准品为溶质，配制浓度为1μg/mL的混合内标标准溶液；再以乙酸乙酯/丙酮（1/1,v/v）为溶剂，以四种烟草特有N-亚硝胺（NNN、NAT、NAB和NNK）标准品为溶质，配制含内标的不同浓度的系列混合标准溶液，其中所述混合标准工作溶液中NNN、NAT和NAB的浓度梯度均为0.200、0.500、1.00、2.00、5.00、10.0、20.0、50.0ng/mL；混合标准工作溶液中NNK的浓度梯度为0.218、0.545、1.09、2.18、5.45、10.9、21.8、54.5ng/mL，其中内标的浓度固定为10.0ng/mL；

b、样品前处理：称取0.25g电子烟烟液样品于15-mL具塞离心管中，加入100μL内标后用2mL磷酸盐缓冲液（20mM，pH9，含0.05g/mL抗坏血酸）稀释后涡旋振荡3min，再用2mL二氯甲烷萃取两次并合并有机相，最后将二氯甲烷在35℃下氮吹浓缩至200μL，即为样品待测液。20mM磷酸缓冲盐是常用的缓冲盐体系，由于烟草特有N-亚硝胺含有吡啶环，在pH值不大于7的情况下会以离子状态存在，在pH值为9时以中性分子状态存在，有利于后续的液液萃取。同时，在缓冲液中加入抗坏血酸，能够有效地避免在样品预处理过程中烟草特有N-亚硝胺被氧化；