[发明专利]一种改良的烟草花粉活力检测方法

说明书

一种改良的烟草花粉活力检测方法，具体包括以下步骤：在每1 ml烟草种子油脂加入60~100 mg烟草花粉混合均匀；将加热后的固体培养基用载玻片薄层涂布于载玻片上；用移液枪吸取10 µl的含有烟草花粉的烟草种子油脂，置于冷却的固体培养基上，用玻璃棒均匀涂布；把载玻片放置于加两层湿润滤纸的培养皿中，然后把培养皿放入培养箱中25℃下暗培养，4h后显微镜下观察花粉萌发情况，统计花粉活力。本发明花粉在烟草种子油脂中分散性好，涂布于固体培养基上花粉不叠加，便于计数和统计花粉活力；烟草种子油脂可促进花粉萌发，缩短了花粉活力检测的时间，提高花粉活力检测效率。

技术领域

本发明属于植物花粉活力研究技术领域，具体涉及一种能提高烟草花粉分散性，缩短花粉萌发时间的烟草花粉活力检测方法。

背景技术

在烟草杂交育种或制种中，通常需要提前采集父本花粉，经过一段时间贮藏，在花粉使用前，进行花粉活力检测，以检验花粉的萌发受精能力，从而为烟草杂交育种和制种提供科学依据。目前烟草花粉活力检测方法主要有花粉染色法、花粉授粉结实法、花粉离体萌发法等。花粉染色法简便快捷，但由于能使未成熟和衰老的花粉着色，而这些花粉不一定具有受精能力，致使花粉活力测定值偏高，花粉活力测定结果不准确；花粉授粉结实法是根据结实情况判断花粉活力，结果比较准确，但由于授粉到柱头上的花粉量多，无法定量判断花粉活力，同时需要的时间较长；花粉离体萌发法是较为理想的检测烟草花粉活力的方法，测定结果较为稳定，更能反应花粉活力的实际状况，该方法是将花粉散落在固体或者液体培养基中进行花粉活力检测，烟草上采用固体培养基检测花粉活力时经常会遇到花粉易叠加聚集，花粉粒计数及活力统计困难的问题；采用液体培养基检测花粉活力，花粉分散性较好，但花粉萌发需要的时间较长。如何同时提高花粉分散性，缩短花粉萌发时间是花粉活力检测工作中亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种简单、快速、可靠的改良烟草花粉活力检测方法，在提高花粉分散性的同时缩短花粉萌发时间，提高花粉活力检测效率。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

一种改良的烟草花粉活力检测方法，先将烟草花粉分均匀散于烟草种子油脂中，烟草种子油脂中烟草花粉的含量为60~100 mg/ml，然后吸取含有烟草花粉的烟草种子油脂，涂布于培养基上，培养后观察花粉萌发情况，进行活力统计。

上述改良的烟草花粉活力检测方法，具体包括以下步骤：

（1）按照每1 ml烟草种子油脂加入60~100 mg烟草花粉的量，称取烟草花粉，加入到烟草种子油脂中，混合均匀；

（2）配制固体培养基，将加热后的固体培养基用载玻片薄层涂布于载玻片上；

（3）用移液枪吸取10 µl的含有烟草花粉的烟草种子油脂，置于冷却的固体培养基上，用玻璃棒均匀涂布；

（4）把载玻片放置于加两层湿润滤纸的培养皿中，然后把培养皿放入培养箱中25℃下暗培养，4h后显微镜下观察花粉萌发情况，统计花粉活力。

经过大量实验证明，本发明具有以下突出优点：

1、花粉在烟草种子油脂中分散性好，涂布于固体培养基上花粉不叠加，便于计数和统计花粉活力；

2、烟草种子油脂可促进花粉萌发，缩短了花粉活力检测的时间，提高花粉活力检测效率。

具体实施方式

实施例1