[发明专利]一种编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因及其应用

权利要求书

1.一种编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因，其特征是：该基因是在缺失的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因序列的5’端融合细胞分泌型多肽MPG的基因序列所形成的，所述缺失的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因序列缺失的是编码NLS 中N端前10个氨基酸的基因序列，该基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种扩增编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因的引物，其特征是：依次以下述a、b、c三对引物进行三次PCR扩增最终得到权利要求1所述的编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因；

引物a：

上游引物：5'-ATAGCCTGGTCGCAGCCGAAAAAGAAACGCAAAGTTCGAAGACACCGCCCCCGCAGCCA-3'

下游引物：5'-ATCCTCGAGTCACTTAGGGTTAAGTGGGG-3'

引物b：

上游引物：5'-ATACCTGGGTGCAGCGGGTTCCACGATGGGTGCCTGGTCGCAGCCGAAAAAGAAACGCA-3'

下游引物：5'-ATCCTCGAGTCACTTAGGGTTAAGTGGGG-3'

引物c：

上游引物：5'-ATAGGATCCGGTGCTCTGTTCCTGGGCTTCCTGGGTGCAGCGGGTTCCACGATGGGT-3'

下游引物：5'-ATCCTCGAGTCACTTAGGGTTAAGTGGGG-3'。

3.一种重组质粒，其特征是：将权利要求1所述的编码重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因插入pET28a（+）质粒中构建而得。

4.一种重组工程菌，其特征是：是将权利要求3所述的重组质粒转化入大肠杆菌中而得。

5.一种重组猪圆环病毒2型Cap蛋白，其特征是：其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

6.根据权利要求5所述的重组猪圆环病毒2型Cap蛋白，其特征是：由权利要求4所述的重组工程菌在IPTG诱导下表达而得。

7.一种重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的制备方法，其特征是：将权利要求4所述的重组工程菌进行培养，待菌液OD600达到0.8-1.0时，加入终浓度为1.0mmol/L的IPTG，继续培养5h；培养结束后离心收集细菌，用PBS重悬，超声破碎收集上清液，重组猪圆环病毒2型Cap蛋白存在于上清液中。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征是，还包括以下步骤：将所得上清液用硫酸铵进行纯化，获得纯化的重组猪圆环病毒2型Cap蛋白。

9.一种亚单位疫苗，其特征是：含有权利要求5或6所述的重组猪圆环病毒2型Cap蛋白。

10.一种PCV2抗体诊断试剂盒，其特征是：含有权利要求5或6所述的重组猪圆环病毒2型Cap蛋白。

11.一种权利要求9所述的亚单位疫苗的制备方法，其特征是：

（1）将权利要求4所述的重组工程菌培养至菌液OD600达到0.8-1.0，然后加入终浓度为1.0mmol/L的IPTG，继续培养5h；培养结束后离心收集细菌，用PBS重悬，超声破碎收集溶有重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的上清液；

（2）取8ml上述溶有重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的上清液，用PBS稀释至500μg/mL，然后加入2ml佐剂，制得亚单位疫苗。

12.一种权利要求9所述的亚单位疫苗的制备方法，其特征是：

（1）将权利要求4所述的重组工程菌培养至菌液OD600达到0.8-1.0，然后加入终浓度为1.0mmol/L的IPTG，继续培养5h；培养结束后离心收集细菌，用PBS重悬，超声破碎收集溶有重组猪圆环病毒2型Cap蛋白的上清液，将该上清液用硫酸铵纯化，得纯化的重组猪圆环病毒2型Cap蛋白；

（2）取8ml纯化的重组猪圆环病毒2型Cap蛋白，用PBS稀释至500μg/mL，然后加入2ml佐剂，制得亚单位疫苗。