[发明专利]一种抑制牛MEN1基因表达的siRNAs序列及其应用

说明书

本发明涉及动物遗传学和动物分子细胞生物学，提供了抑制牛MEN1基因表达的siRNAs，所述的siRNAs为小双链RNA，包括三个siRNAs，其正义链核苷酸序列为SEQ NO.4、SEQ NO.5、SEQ NO.6所示；其反义链核苷酸序列为SEQ NO.7、SEQ NO.8和SEQ NO.9所示；本发明提供了含上述正反义链的抑制牛MEN1基因的siRNAs可以有效抑制牛MEN1基因表达，可为牛MEN1基因功能的研究提供有效技术工具，并可用于牛代谢疾病的相关研究。

技术领域

本发明涉及动物遗传学和动物分子细胞生物学，提供了一种抑制牛MEN1基因表达的siRNAs序列及其应用。

背景技术

牛MEN1基因与人或小鼠的MEN1高度同源，其编码蛋白menin与人或小鼠的同源性分别高达98.69％和96.73％。人或小鼠的研究成果暗示牛的MEN1/menin在调节牛(奶牛)机体正常代谢中的重要调节作用，推测其异常表达与牛的代谢紊乱疾病(酮病、酸中毒、脂肪肝等)的发作有密切关系。近年来的研究表明，menin通过参与基因组蛋白表观遗传学修饰进而影响下游基因的转录、还可与基因组蛋白质互作调节基因组的稳定性、参与调节细胞周期的调控因子而调控细胞的分裂增殖，其表达异常与白血病、糖尿病、(非酒精性)脂肪肝等疾病密切相关。同时，MEN1引发的癌变器官通常是激素分泌的重要器官，如胰岛β细胞分泌胰岛素、垂体前叶分泌催乳素等，因而更突显menin在调控机体正常发育、平衡稳态的机体代谢过程中的重要功能。目前，MEN1/menin的许多研究者已经开始展望将menin/MEN1用于一些疾病的治疗。抑制细胞中MEN1/menin的表达可以为研究者体外探索揭示menin可调控的具体生物学活性和功能提供有效手段和工具，也为将来用于疾病的基因治疗提供必要的研究基础。

RNA干涉(RNA interference)技术是近几年发展起来的一种抑制基因表达的最有力的工具之一。此技术采用19-23个碱基或发夹状不同长度的双链RNA引起序列同源的mRNA降解，可使不同类型细胞的靶向基因表达明显降低，这个现象在进化过程中保守而且广泛。这种新兴的生物技术用于抑制某些过度表达基因的表达，而不影响正常基因的表达，在哺乳动物细胞中建立RNA干涉技术，可以用于研究某些特定基因的功能，从而可以解决某些疾病的发病机制，而且为疾病分子水平的治疗提供了新的技术和方法，有一定的应用价值。因此如何利用该技术实现抑制细胞中MEN1/menin的表达成为研究的重点之一。

发明内容

本发明的发明人在上述技术背景下，提供了提供了抑制牛MEN1基因表达的siRNAs，所述的siRNAs为小双链RNA，包括三个siRNAs，其正义链核苷酸序列为SEQ NO.4、SEQ NO.5、SEQ NO.6所示；其反义链核苷酸序列为SEQ NO.7、SEQ NO.8和SEQ NO.9所示；本发明提供了含上述正反义链的抑制牛MEN1基因的siRNAs可以有效抑制牛MEN1基因表达，可为牛MEN1基因功能的研究提供有效技术工具，并可用于牛代谢疾病的相关研究。

本发明所提供的抑制牛MEN1基因表达的siRNAs，所述的siRNAs为小双链RNA，包括三个siRNAs，其正义链核苷酸序列为SEQ NO.4、SEQ NO.5、SEQ NO.6所示；其反义链核苷酸序列为SEQ NO.7、SEQ NO.8和SEQ NO.9所示。

上述序列是由如下过程获得的：

根据Genebank中牛MEN1(Bos taurus multiple endocrine neoplasia I)基因完整mRNA序列(accession NO.：NM_001076161)，选择三个靶序列，进而设计特异的可抑制牛MEN1基因表达的siRNAs。

所选择的靶序列分别为:

核苷酸序列如SEQ NO.1：5’CCGTTGACCTGTCTCTCTA3’所示；