[发明专利]一种撒瓦那柏初代组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种撒瓦那柏初代组培方法，属于苗木繁殖技术领域。

背景技术

撒瓦纳柏是一种四季均为黄色的新引进的彩叶植物，由于枝条流线形，色彩鲜明，日本早己在园林中大量应用，而我国在园林绿化中还没有见到。撒瓦纳一般采用种子播种、扦插方法繁殖，但种子繁殖容易发生变异，扦插繁殖的穗源较少，不能快速大量繁殖，所以用组织培养的方法是撒瓦纳柏快繁新途径。

目前，在撒瓦纳柏的初代组织培养过程中，培养基、激素种类和浓度都很重要，但是现有技术中的选择都不够合理，导致形成分枝过少，易出现玻璃花、褐化等现象。

发明内容

发明目的：为了解决上述技术问题，本发明提供一种撒瓦那柏初代组培方法。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明公开了一种撒瓦那柏初代组培方法，包括以下步骤：

(1)培养基的配制：选择基础培养基，加入蔗糖和琼脂，再加入6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)或者萘乙酸，调节pH值，灭菌，即得；

(2)外植体处理：选择不带芽的外植体，清洗，消毒；

(3)接种培养：将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养。

作为优选，所述步骤(1)中基础培养基为MS、1/2MS(1/2MS培养基中大量元素为MS培养基的一半)、B5或者WPM培养基。

作为另一种优选，所述步骤(1)中蔗糖和琼脂的浓度分别为30g/L和7g/L。

作为另一种优选，所述步骤(1)中6-苄氨基腺嘌呤或者萘乙酸的浓度均为0.05-1mg/L。

作为另一种优选，所述步骤(1)中pH值为5.8～6.0，灭菌条件为：121℃高压下灭菌25min。

作为另一种优选，所述步骤(2)中清洗方法为：先用洗衣粉水溶液浸泡干净后，再用纯水冲洗2小时。

作为另一种优选，所述步骤(2)中消毒方法为：先用75％酒精处理30秒，再用0.1％的升汞浸泡5-8min，最后用无菌水冲洗5次，残留的水分用无菌滤纸吸取。

作为另一种优选，所述步骤(3)中培养室的培养条件为：光照16h/d，光照度为2000lx，温度控制在(25±2)℃。

技术效果：相对于现有技术，本发明方法不仅具有现有技术中组培繁殖的优势，还通过特定的培养基、激素种类和浓度，与其它处理方法相结合，能够显著降低撒瓦那柏的污染率，提高其成活率，使撒瓦纳柏能顺利形成更多分枝，不会出现玻璃化、褐化等现象。

附图说明

图1为不同的培养基对初代培养效果的影响；

图2为不同浓度的6-BA对初代培养效果的影响(横坐标中1、2、3、4分别为0mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、1mg/L)；

图3为不同浓度的NAA对初代培养效果的影响(横坐标中1、2、3、4分别为0mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、1mg/L)；

具体实施方式

实施例1

(1)培养基的配制：选择MS培养基作为基础培养基，加入蔗糖和琼脂，浓度分别为30g/L和7g/L，再加入6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)，其浓度为0.05mg/L，调节pH值为5.8～6.0，121℃高压下灭菌25min，即得；

(2)外植体处理：选择不带芽的外植体，先用洗衣粉水溶液浸泡干净后，再用纯水冲洗2小时，然后用75％酒精处理30秒，再用0.1％的升汞浸泡5min，最后用无菌水冲洗5次，残留的水分用无菌滤纸吸取；

(3)接种培养：将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养，培养条件为：光照16h/d，光照度为2000lx，温度控制在(25±2)℃。

实施例2：

(1)培养基的配制：选择B5培养基作为基础培养基，加入蔗糖和琼脂，浓度分别为30g/L和7g/L，再加入6-苄氨基腺嘌呤，其浓度为1mg/L，调节pH值为5.8～6.0，121℃高压下灭菌25min，即得；

(2)外植体处理：选择不带芽的外植体，先用洗衣粉水溶液浸泡干净后，再用纯水冲洗2小时，然后用75％酒精处理30秒，再用0.1％的升汞浸泡8min，最后用无菌水冲洗5次，残留的水分用无菌滤纸吸取；

(3)接种培养：将步骤(2)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养，培养条件为：光照16h/d，光照度为2000lx，温度控制在(25±2)℃。

实施例3：