[发明专利]绿原酸在激活机体的WNT信号通路中的用途及其研究方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及绿原酸在激活机体的WNT信号通路中的用途及其研究方法。

技术背景

绿原酸(chlorogenicacidCGA)又名咖啡鞣酸，是由咖啡酸(caffeicacidCA)和奎尼酸(quinicacidQA)组成的缩酚酸，其化学名为3-o-咖啡酰奎尼酸(3-o-caffeoylquinicacidCGA)。绿原酸是植物在进行有氧呼吸的过程中，经磷酸戊糖途径中间产物合成的一种苯丙素类物质。绿原酸已经被开放应用于食品，保健品，化妆品和药品等多个领域。由于它广泛的存在于常见的各种蔬菜水果中，具有多种生物活性，如:心血管保护作用、抗氧化作用、抗紫外及抗辐射作用、抗诱变及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用、降脂降糖作用、免疫调节作用等。在医药化工和食品等领域都具有广泛的应用。目前已有大量证据显示绿原酸具备抗癌功能，然而，目前为止绿原酸抗癌功能的分子学作用机制尚不明确，从而限制了人们从分子和基因层面对其抗癌机理相关的信号通路、精确的作用靶点、具体生物因子的准确把握和应用。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了绿原酸的一种从基因和分子水平调控机体WNT信号通路新用途，即绿原酸在激活机体的WNT信号通路中的用途，建立了WNT信号通路与绿原酸抗癌功能之间的分子学联系，提供了一种通过绿原酸精确调控机体WNT信号通路的方法。通过该应用可进一步用于指导肿瘤的治疗，也可以用于建立相关的研究模型用于对WNT信号通路的具体作用原理或其他相关的应用。

进一步的，所述机体为患癌机体，更进一步的为荷瘤小鼠。

进一步的，在上述应用中通过上调基因GSK-3β和APC的表达来激活WNT信号通路。

进一步的，还同时下调β-Catenin基因的表达。

作为可选方式，在上述用途中，将绿原酸制作成含有效剂量的药物制剂后施用于机体。

作为可选方式，在上述用途中，所述绿原酸的使用剂量为：1-100mg/kg。优选为20～40mg/kg。

作为可选方式，所述的药物制剂是以绿原酸为有效成分，加入一种或多种药学上可接受的药用赋形剂制备而成的制剂。

作为可选方式，所述的药物中每制剂单位含有绿原酸1～3000mg。

作为可选方式，所述的药物是口服制剂、注射制剂或外用透皮给药制剂。

作为可选方式，所述的药物是绿原酸浓度为1～40mg/mL的生理盐水注射液。也可选择其他药学上可接受的注射液。

本发明还提供了一种绿原酸激活机体WNT信号通路的分子机制的研究方法，包括以下步骤：

(1)建立动物模型；

(2)采用绿原酸对模型动物进行干预作为实验组，同时建立对照组；

(3)采用基因芯片技术获得实验组和对照组中的差异表达基因；

(4)采用时间序列分析、基因功能分类分析(GO)和信号通路分析筛选出相关的基因；

(5)采用ELISA技术或分子印记检测(westernblottest)技术或PCR技术对步骤(4)筛选出的基因进行验证。

采用目前的基因芯片对模型动物的基因表达进行分析时，由于方法本身的系统误差和随机误差(如RNA的提取、反转录、杂化过程中产生的误差以及基因芯片和RNA质量的影响等)会在一定程度上影响分析结果的准确性，该方法虽然可以快速基因表达的差异但由误差导致的假阳性结果的可能性也很大，本发明通过将基因芯片技术分析获得的差异表达基因与pathway(信号传导通路)和GO(geneontology)两个指标来进行分析和相互验证，将差异基因控制在研究目标相关功能基因的范围内有助于高效准确地筛选出目标基因，同时采用ELISA技术或分子印记检测(westernblottest)技术或PCR技术对步骤(4)中筛选出的基因进行验证，可有效避免假阳性，提升结果的可信度。

作为可选方式，所述步骤(1)中的动物模型为小鼠EMT-6乳腺癌动物模型，本领域技术人员也可根据研究需要和实际情况灵活选择其他动物模型。

作为可选方式，所述步骤(2)中的对照组可以包括阳性对照、阴性对照、空白对照，本领域技术人员可根据研究需要和实验对照的公知设计原理进行灵活的选择。例如，所述对照组可以包括多烯紫杉醇干预组、干扰素干预组和生理盐水空白对照组。