[发明专利]一种筛查荷斯坦奶牛白细胞粘附缺陷病携带者的分子检测方法

权利要求书

1.一种鉴定荷斯坦牛是否携带BLAD的竞争性等位基因特异性PCR成套引物，为如下1)或2)

1)由引物4、引物5和引物3组成；

2)由引物1、引物2和引物3组成；

所述引物1的核苷酸序列为序列1；

所述引物2的核苷酸序列为序列2；

所述引物3的核苷酸序列为序列3；

所述引物4的核苷酸序列为序列4；

所述引物5的核苷酸序列为序列5。

2.根据权利要求1所述的成套引物，其特征在于：所述引物4和所述引物5的5’端均连有不同的荧光基团。

3.根据权利要求2所述的成套引物，其特征在于：所述引物4的5’端连有FAM荧光基团；所述引物5的5’端连有HEX荧光基团。

4.根据权利要求1-3中任一所述的成套引物，其特征在于：

1)中，所述引物1、所述引物2和所述引物3的摩尔比为2：2：5；

2)中，所述引物4、所述引物5和所述引物3的摩尔比为2：2：5。

5.鉴定荷斯坦牛是否携带BLAD的竞争性等位基因特异性PCR试剂，包括权利要求1-4中任一所述的成套引物；

所述成套引物中的引物3在所述PCR试剂中的浓度为30μM；

所述成套引物中的引物4和引物5在所述PCR试剂中的浓度均为30μM。

6.鉴定荷斯坦牛是否携带BLAD的竞争性等位基因特异性PCR试剂盒，包括权利要求1-4中任一所述的成套引物或权利要求5所述的PCR试剂。

7.权利要求1-4任一所述的成套引物或权利要求5所述的PCR试剂或权利要求6所述的试剂盒在制备鉴定荷斯坦牛是否携带BLAD产品中的应用。

8.一种鉴定或辅助鉴定荷斯坦牛是否携带BLAD的方法，包括如下步骤：用权利要求3或4所述的成套引物中的1)对荷斯坦牛进行荧光定量PCR扩增，检测PCR扩增产物的荧光信号；若PCR扩增产物发FAM荧光，则待测牛不携带或候选不携带BLAD；若PCR扩增产物发HEX荧光，则待测牛携带或候选携带BLAD。