[发明专利]一种与胃癌相关的血清/血浆lncRNA标志物试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种与胃癌相关的血清/血浆lncRNA标 志物试剂盒。

背景技术

胃癌是世界第二高发肿瘤，同时也是胃肠道肿瘤中最常见肿瘤之一。尽管胃癌恶 性程度较高，但若能早期发现早期治疗，仍可获得最佳治疗效果，早期胃癌手术切除率为 90％-100％，5年生存率可达70％-100％，与进展期胃癌相比，两者治疗效果存在着巨大的 反差。但大部分患者就诊时已处于晚期。目前对胃癌的生物学标志进行了大量而广泛的研 究，包括基因标记、血清学标记和细胞学标记等，由于这些指标的特异性和敏感性各有差 异，对于早期胃癌目前还没有准确有效的筛查方法，也缺乏可靠的诊断措施。由鉴于此，胃 癌早期诊断率亟待提高，寻找有效的标志物对胃癌早期诊断、促进其预后有重要意义。

非编码RNA(ncRNA)是近年来肿瘤分子生物学研究领域的一个热点，它分为miRNA 和lncRNA。LncRNA广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的长度超过200nt的RNA分 子，本身不具有开放阅读框，且具有高度保守性、时序性和组织特异性，通过与靶mRNA结合， 降解或者抑制mRNA的翻译导致靶基因的转录后沉默，从而调节生物体内在的与机体生长、 发育、疾病发生过程有关的基因的表达。

在本发明作出之前，近年来，lncRNA与肿瘤的关系已经成为研究的热点和焦点，已 经发现lncRNA通过与基因的共表达和肺癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌等发病高度相关。研究已 经证实血清/血浆中存在着几百种lncRNAs，这些长链分子性质稳定，含量丰富且不会降解， 易于定量检测，并存在着显著的疾病特异性。血清/血浆lncRNA作为肿瘤诊断和预后分子标 志物不仅创伤小，方法便捷，还能改进疾病诊断，肿瘤分类，预后估计、疗效及复发预测的准 确度。但是，血清/血浆lncRNA的表达量还是相对较低，若无标准化试剂盒的规范化步骤，血 清/血浆lncRNA不易检出，失去早期诊断的可能；另一方面，仅采用一种血清/血浆lncRNA作 为肿瘤标志物往往特异性不足，因仅采用一种血清/血浆lncRNA作为肿瘤标志物试剂盒敏 感度和特异度均较低，从而导致早期胃癌诊断的错诊率和漏诊率大大增加。没有用于早期 胃癌患者血清学诊断的较为稳定的生物标志物，就不能筛选出胃癌异常表达的血清/血浆 lncRNAs作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述缺陷，提出一种与胃癌相关的血清/血浆lncRNA标 志物试剂盒。

一种与胃癌相关的血清/血浆lncRNA标志物试剂盒，其主要技术特征在于血清/血 浆lncRNA标志物为MALAT1和HOTAIR的组合。

所述该引物为MALAT1和HOTAIR的引物，其中MALAT1的上下游引物序列是SEQNo.1 和SEQNo.2；HOTAIR的上下游引物序列是SEQNo.3和SEQNo.4。

所述该试剂盒用于检测血清/血浆中MALAT1和HOTAIR。

所述该试剂盒还包括PCR反应常用的酶和试剂。

本发明的有益效果：

本发明提供的血清/血浆lncRNA标志物作为胃癌诊断的标志物的优越性在于：

(1)血清/血浆lncRNA是一种新型生物标志物，区别于传统生物标志物，不仅稳定、 微创、易于检测，且定量精确，将大大提高疾病诊断的敏感性和特异性，该类lncRNA生物标 志物的成功开发有助于胃癌的辅助诊断，为其他疾病生物标志物的研制提供借鉴。

(2)血清/血浆lncRNAs试剂盒是一种系统、全面的诊断和监测试剂盒，可用于胃癌 患者的辅助诊断，有助于反映胃癌患者的疾病状态，为临床医生快速准确掌握患者病情、及 时采取更具个体化的防治方案提供支持。

(3)采用严密的设计和评价体系，本发明人采用lncRNA芯片检测以获取疾病特异 和异常表达的血清/血浆lncRNAs表达谱，并应用qRT-PCR的方法进行单个验证，采用了染料 法进行验证；以上方法和策略的应用加速和保证了血清/血浆lncRNAs生物标志物和诊断试 剂盒的应用，也为其他疾病生物标志物的研制提供方法和策略上的借鉴。