[发明专利]一种NKT细胞诱导培养的添加剂及诱导培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞领域，具体涉及一种NKT细胞诱导培养的添加剂及诱导培养NKT细胞的方法。

背景技术

自然杀伤T(naturalkillerT，NKT)细胞，是一群细胞表面既有T细胞受体TCR，又有NK细胞受体的特殊T细胞亚群。NKT细胞能够表达NKT细胞标志NKT1.1的T细胞，其机能具有T细胞和NKT细胞双重特征。NKT细胞在TCR和NKR介导下，产生大量的IL-4及INF-γ，对肿瘤细胞有杀伤作用。

NKT细胞主要包括免疫调节和细胞毒作用，NKT细胞的抗原识别与传统的T细胞不同，不能识别由经典的MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子提呈的脂类、蛋白质抗原，在这些抗原的刺激下NKT细胞被激活，并迅速的产生IL-4、IFN-γ、IL-10、IL-13等细胞因子，从而在抗肿瘤、抗感染、抑制自身免疫性疾病及移植免疫中发挥重要的作用。NKT细胞是联系固有免疫和获得性免疫的桥梁之一。

NKT细胞以双刃剑的方式调节着免疫系统，越来越引起人们的关注，对NKT细胞的免疫活化及与疾病的关联的进一步研究将为人们在抗肿瘤、抗自身免疫性疾病及移植耐受中提供一新的有效的治疗手段，具有广泛的应用前景。

目前，诱导培养NKT细胞的方法是从外周血中分离出单个核细胞，然后使用含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基以及IL-2和IL-15两种细胞因子联合诱导培养得到NKT细胞。但现有的诱导培养NKT细胞的方法NKT细胞的扩增倍数不够大，用于免疫治疗或者亚健康保健的话很大程度影响免疫治疗效果。而且现有的诱导培养NKT细胞的方法使用胎牛血清，可能会引入一些支原体和病毒，存在一定的安全隐患。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术存在的问题，提供一种NKT细胞诱导培养的添加剂及诱导培养NKT细胞的方法。本发明所述NKT细胞诱导培养的添加剂能促进NKT细胞大量增殖，而且对于肿瘤细胞具有很好的杀伤效果。

为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种NKT细胞诱导培养的添加剂，包括生长因子IL-21、IL-7和OKT-3。生长因子IL-21、IL-7和OKT-3与公认的生长因子IL-2和IL-15具有协同作用，可以更好地诱导和促进NKT细胞的增殖。

其中，在一些优选实施方案中，所述NKT细胞诱导培养的添加剂中所述生长因子IL-21的用量为10ng/mL～100ng/mL。

在一些优选实施方案中，所述NKT细胞诱导培养的添加剂中所述生长因子IL-7的用量为10ng/mL～100ng/mL。

在一些优选实施方案中，所述NKT细胞诱导培养的添加剂中所述生长因子OKT-3的用量为20ng/mL～100ng/mL。

在一些实施方案中，所述NKT细胞诱导培养的添加剂还包括X-VIVO-15培养基。X-VIVO15无血清培养基，不含任何外源生长因子、人造细胞增殖刺激因子或不明成分的添加剂，可提供一个营养成分完全且平衡的体外环境，利于NKT细胞的生长和增殖。

在一些实施方案中，所述NKT细胞诱导培养的添加剂还包括生长因子IL-2和IL-15。

在一些优选实施方案中，所述NKT细胞诱导培养的添加剂中所述生长因子IL-2的用量为100U/mL～1000U/mL。

在一些优选实施方案中，所述NKT细胞诱导培养的添加剂中所述生长因子IL-15的用量为10ng/mL～100ng/mL。

在一些具体实施方案中，所述NKT细胞诱导培养的添加剂由X-VIVO-15培养基、生长因子IL-2、IL-15、IL-21、IL-7和OKT-3组成，其中生长因子IL-2的用量为300U/mL，所述生长因子IL-15的用量为30ng/mL，所述生长因子IL-21、IL-7和OKT-3的用量均为50ng/mL。

本发明还提供了一种诱导培养NKT细胞的方法，取外周血单个核细胞，按1×10⁶cell/mL接种于NKT细胞诱导培养的添加剂中，放置37℃、5％CO₂恒温培养箱中诱导培养；其中所述NKT细胞诱导培养的添加剂由X-VIVO-15培养基、生长因子IL-2、IL-15、IL-21、IL-7和OKT-3组成，其中生长因子IL-2的用量为300U/mL，所述生长因子IL-15的用量为30ng/mL，所述生长因子IL-21、IL-7和OKT-3的用量均为50ng/mL。

在一些实施方案中，所述诱导培养NKT细胞的方法，还包括每隔2～3天对细胞进行补液的步骤。