[发明专利]基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体。

背景技术

本发明旨在通过在毛囊中过表达FGF5s基因，起到抑制FGF5的作用，延长绒毛生长期，从而提高羊绒长度，获得生产高品质羊绒的转基因绒山羊。相关研究资料表明，FGF5基因在胚胎发育时期也发挥着重要的作用，因此，将PB-CMV-FGF5s-EGFP载体启动子更换为毛囊特异启动子KAP6.1。

发明内容

本发明提供了一种基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体及其应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体，所述表达载体通过将保存的PB-CMV-FGF5s-EGFP载体中的CMV启动子更换为毛囊特异启动KAP6.1构建所得。

其中，所述表达载体包括5’UTR：847-886bp；918-936bp；KAP6.1promoter：1371-2411bp；FGF5sCDS：2418-3126bp；EF1promoter：3141-3686bp；EGFP：3700-4455bp；嘌呤霉素(puro)：4510-4109bp；3’UTR：6100-6134bp；氨苄霉素(AMP)：7790-8645bp。

本发明还提供了上述基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体用于构成转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞株方面的应用。

本发明具有以下有益效果：

1)作为过表达FGF5s蛋白的细胞株模型，可用于绒山羊FGF5s基因功能研究。

2)该细胞株可作为供核细胞，可用于制备毛囊特异表达FGF5s基因转基因绒山羊的制备。

3)可将PB-CMV-FGF5s-EGFP载体中的FGF5s基因更换为其它基因，用于转基因细胞株的制备。

附图说明

图1为本发明实施例一种基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体的结构示意图。

图2为本发明实施例中转染12d后相差显微镜和荧光显微镜相同视野中的细胞示意图；

图中，A：相差Contrastmicroscope(10×)；B：荧光Fluorescentmicroscope(10×)。

图3为本发明实施例中转基因细胞克隆的PCR鉴定示意图。

图中，M：DL2000分子标记；1：转基因细胞PCR；2：以质粒PB-KAP6.1-PURO-EGFP-FGF5s为模版的对照；3：未转染细胞PCR

具体实施

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

如图1所示，本发明实施例提供了一种基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体，所述表达载体通过将保存的PB-CMV-FGF5s-EGFP载体中的CMV启动子更换为毛囊特异启动KAP6.1构建所得。

其中，所述表达载体包括5’UTR：847-886bp；918-936bp；KAP6.1promoter：1371-2411bp；FGF5sCDS：2418-3126bp；EF1promoter：3141-3686bp；EGFP：3700-4455bp；嘌呤霉素(puro)：4510-4109bp；3’UTR：6100-6134bp；氨苄霉素(AMP)：7790-8645bp。

本发明还提供了上述基于PiggyBac转座子系统的毛囊特异表达载体用于构成转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞株方面的应用

实施例

利用Lipofectamine^TM2000介导环化质粒PB-KAP6.1-FGF5s-EGFP和转座酶辅助载体共转染陕北白绒山羊胎儿成纤维细胞，嘌呤霉素筛选12d后，出现绿色荧光密集的单克隆细胞群，挑取单克隆扩大培养，最终获得了稳定表达绿色荧光蛋白的绒山羊胎儿成纤维细胞株(图2)。以转基因细胞基因组DNA为模版，PCR鉴定结果表明PB-KAP6.1-FGF5s-EGFP载体已成功整合到绒山羊胎儿成纤维细胞基因组DNA中。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。