[发明专利]一种具有益生元效应的莲子低聚糖单体的快速分离方法

权利要求书

1.一种具有益生元效应的莲子低聚糖单体的快速分离方法，其特征在于：所述方法具体包括以下步骤：

1）选料烘干：选取颗粒饱满、无损伤的新鲜莲子，筛选去芯后于40~50℃下烘至水分含量为4~7%；

2）粉碎过筛：将步骤1）干燥后的莲子粉碎，过40目筛；

3）加水复配：取步骤2）所得莲子粉末，按料液比1:5加入去离子水混匀进行复配；

4）水洗淀粉：将步骤3）所得复配料液过100目筛，并用莲子重量4~6倍的去离子水冲洗滤渣，合并滤液后置于4℃条件下静置沉淀8 h，离心去除沉淀，再将所得上清液与冲洗后的莲子滤渣合并：

5）恒温回流提取：将步骤4）所得上清液和莲子滤渣于75~85 ℃下恒温回流提取1.5~2 h；

6）抽滤：提取结束后将提取液真空抽滤，弃去滤渣；

7）醇析：将步骤6）所得滤液于60~65℃下浓缩至原体积的1/5~1/4后加入浓缩液3~5倍体积、质量浓度为95%的乙醇，混匀后于4℃下静置10~12 h；

8）离心浓缩：将步骤7）所得溶液离心后去除沉淀，上清液于55~65℃下浓缩至原体积的1/3~2/5；

9）冷冻干燥：将步骤8）所得浓缩液经冷冻干燥，得莲子低聚糖粗糖粉末；

10）MPLC分离：将步骤9）所得莲子低聚糖粗糖粉末溶于去离子水中，配制成浓度为0.1~0.2 g/mL的溶液，然后将溶液经0.22 μm微孔滤膜过滤后注入MPLC进行分离，根据保留时间针对性地收集各目标化合物，收集液分别于55~65℃下真空旋转蒸发回收溶剂后，经冷冻干燥得含特定化合物的冻干粉末；

11）MPLC二次分离：取步骤10）所得含特定化合物的冻干粉末，分别按步骤10）的操作和色谱条件进行二次进样，收集相同保留时间的各目标峰，经溶剂回收、冷冻干燥即得莲子低聚糖单体粉末；

MPLC的分离系统包括中压特制玻璃柱，色谱泵、DAD紫外全波长扫描器和FLASH ELSD蒸发光散射检测器，自动馏分收集器和手动样品加载模块；

所述中压特制玻璃柱为Claricep Flash HILIC亲水柱，其填料粒径为20-35μm，孔径100A，比表面320 m²/g，碳含量5.0%；

所述FLASH ELSD蒸发光散射检测器的检测条件为：吹扫氮气压力为2.5~3.5bar，漂移管温度85~95℃；

MPLC分离中的上样体积为1 mL，流动相为乙腈与水的二元混合体系，其流速为30~45mL/min，柱温为25℃；

流动相比例变化的具体程序为：流动相中乙腈比例为85~90%保持15~20min，随后将乙腈比例在30~35min内降至65~60%，保持50~60min，再将乙腈比例上升至85~90%，保持15~20min。