[发明专利]一种琼脂基质育苗快捷诱发稻瘟病的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物病理学技术和微生物学技术。具体是一种琼脂基质育苗快捷诱发稻瘟病的方法。

背景技术

稻瘟病是我国水稻生产的重大病害，大流行年曾给我国造成稻粮损失150亿公斤。尽管目前对稻瘟病的认识已相当深入，但要实现持续安全高效地控防稻瘟病的危害，仍需要大量的研究投入。而稻瘟病的许多研究均离不开人工诱发病害这基本手段，即使是分子领域的研究，如病菌致病相关基因问题，或寄主抗病相关基因问题，往往都需要人工诱发病害的结果来解答。至今，有关稻瘟病人工诱发病害的技术已经相当成熟，这些诱发病害技术归结起来，主要有水稻成株期接种发病和苗期接种发病方法两大类。通常成株期诱发病害能获得较为切合生产实际的结果，因而在水稻抗病性评比和某些生产试验中应用较多，但在成株期诱发病害的方法体系中，存在耗时费力；颇占空间场地；环境条件容易影响试验结果等突出弊病；因而限制了其在许多试验工作中的应用。一般地，苗期诱发病害的方法，使用的稻苗比成株期的相对地小，试验占用时间和空间方面，与成株期诱发病害相比，已大有改观。不过，目前广为应用的苗期诱发病害方法均是在稻苗的3～5叶期后，利用完全展开的幼苗叶片进行接种，这种方法体系中，育苗耗时2周以上，接种观察耗时1周以上，试验周期通常要跨越3周多的时长，这对某些要求短期内获得结果的研究工作，如分子植病研究的致病突变体鉴定，抗病基因表达，以及侵染过程的病菌-寄主互作信息传递等，仍有耗时过长之嫌；而且，为获得健壮的稻苗，需要提供充分的阳光和补充营养，整个方法体系仍需使用温室等较大的空间场地；试验期间的湿度、温度、肥水等局部条件控制，也存在较大的技术难度，或者颇受装备条件的限制等。

发明内容

本发明的目的是提供一种琼脂基质育苗快捷诱发稻瘟病的方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种琼脂基质育苗快捷诱发稻瘟病的方法，是利用琼脂作育苗基质，在微小水稻幼芽阶段，接种稻瘟病菌，因而能在短期内获得接种发病结果，快捷诱发稻瘟病方法的步骤如下：

1.准备配套营养液

按比例配备配套营养液，该营养液组分为：硝酸钾0.5g、磷酸二氢钾0.5g、尿素0.5g、水1000.0ml。

2.配备育苗琼脂基质

用琼脂与步骤1配备的营养液组配成育苗基质，组配比例为：琼脂4g、营养液1000ml；加热至琼脂充分熔化后，分别倒入洁净的培养皿内，冷却后凝固形成平板，即为育苗琼脂基质。

3.播种

按常规条件将水稻种子浸种和催芽，获得露白萌发种子，用小镊子夹取已露白萌发的水稻种子，分别播埋在步骤2备好的培养皿育苗琼脂基质内。

4.在封闭的小生境内培育水稻幼芽

步骤3播种完毕后，将培养皿及其盛载的材料一起置于小方盘内，取保湿罩将培养皿全部罩在小方盘内，往小方盘内注入薄层清水，使保湿罩内处于封闭状态，然后将该全套育苗器具转到普通实验室内近窗口的桌面上，在室温为28℃条件下培育水稻，直至第一完全叶生长露出，形成针状幼芽。

5.准备接种体孢子液

按常规方法培养制备稻瘟病菌的分生孢子，用清水将孢子洗脱悬浮，配成孢子浓度为1×10⁶个/ml的孢子液，作为接种体孢子液。

6.接种病菌

将步骤5准备的孢子液装入喷雾器，取出步骤4准备的水稻幼芽材料，打开罩在幼芽外面的保湿罩，把接种体孢子液对着幼芽均匀喷雾，直至针状幼芽表面布满一层雾滴为止，然后重新罩回保湿罩。

7.接种后培育管理

将步骤6接种后的幼芽，重新转回原来育苗之处，保持原来育苗的温度条件继续培育。接种5天后，在幼小的植株上呈现清晰的稻瘟病坏死病斑。

本发明的优点是：

1)整套方法全程时间短，从播种到典型发病一般只需要8天。

2)温度、湿度、水肥和小生境微生物等重要发病条件均能高度一致，而且容易控制。

3)容易创造无菌的育苗环境。

4)实施操作简易，总体技术简单，容易实现技术方法的标准化。

附图说明

图1是本发明水稻种子播种后示意图。

图中，水稻种子播种在培养皿内的琼脂基质内，培养皿置于小方盘内。

图2是本发明水稻种子播种后罩上保湿罩的示意图。

图中，水稻种子播种在培养皿内的琼脂基质内，培养皿置于小方盘内，保湿罩将培养皿及其皿内材料罩封在小方盘内。

图3是本发明播种3天后水稻种子生长形成的针状幼芽。