[发明专利]含猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒在核酸扩增检测中作为标准样品的应用

权利要求书

1.含猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒在猪圆环病毒核酸扩增检测中作为标准样品的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述含猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒是通过下述方法制备的：

1)获得用于猪圆环病毒2型NAT检测的ORF2基因序列，如序列表中SEQIDNO：1所示；

2)将步骤1)获得的PCV2ORF2基因的序列克隆于腺病毒穿梭载体上，获得含猪圆环病毒2型ORF2基因序列的重组穿梭质粒；

3)将步骤2)获得的重组穿梭质粒与骨架质粒使用限制性内切酶线性化，纯化后共转染细胞，经连续传代获得稳定增殖的重组腺病毒；

4)对所述重组腺病毒鉴定后，于HEK293细胞上进行大量培养，收集病毒，加入冻干保护剂，分装，真空状态下冷冻干燥；

5)对重组腺病毒经均匀性、稳定性检验后，通过荧光定量PCR方法和TCID₅₀测定进行定值，即得含猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒标准样品。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述腺病毒穿梭载体为pacAd5CMVK-NpA。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述骨架质粒为pacAd59.2-100。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述转染细胞为HEK293T细胞。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述冻干保护剂为海藻糖。

7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，定值后，含猪圆环病毒2型ORF2基因含量为8.17×10⁹GEq/mL，在HEK293细胞上的TCID₅₀为3.56×10⁷/0.05mL。