[发明专利]一种干细胞制剂及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及干细胞领域，具体涉及一种干细胞制剂及其制备方法与应用。尤其涉及一种含脂肪干细胞的干细胞制剂及其制备方法与制备治疗股骨头坏死的药物中的应用。

背景技术

股骨头坏死，也叫做股骨头无菌性坏死，在骨关节疾病中挑战性及破坏性疾病，也是骨科领域常见且难治性疾病。股骨头坏死可发生于任何年龄但以31-60岁最多，无性别差异，开始多表现为髋关节或其周围关节的隐痛、钝痛，活动后加重，进一步发展可导致髋关节的功能障碍，股骨头坏死严重影响患者的生活质量和劳动能力，若治疗不及时，还可导致终身残疾。

股骨头坏死的治疗方法，由单一药物治疗，发展到髓新减压、旋转截骨、骨水泥填充术等保守、手术及组织工程技术治疗。非手术治疗包括介入治疗、高压氧治疗、物理疗法。目前治疗股骨头坏死的方法虽然很多，但尚无满意的治疗方案。手术创伤性大，技术要求高，有可能加重原有的创伤，增加患者的心理及经济负担。药物治疗股骨头坏死配方很多，但是治愈效果差、病人受折磨时间长，费用巨大。

目前治疗股骨头坏死的最为尖端的技术是干细胞治疗股骨头坏死，也是疗效中最好的一种手段。干细胞具有多向分化的能力和高度的可塑性，当干细胞被置于新的生存坏境下，他们的特性就会发生改变，具有很强的分化能力，它穿透毛细血管壁，特异性的分化为身体所需要的细胞并对于坏死的细胞进行修复和再生。干细胞能新生血管，恢复血管功能是治疗股骨头坏死的重要原因。干细胞能分化为成骨细胞，促进钙质沉着，修复被破坏的股骨头。同时，干细胞还有调节机体免疫功能，调节神经内分泌功能，对股骨头坏死的治疗有全面支持作用。

在股骨头坏死的干细胞治疗中，常用的种子细胞为骨髓间充质干细胞，但是由于获得自体骨髓数量极少，难以体外培养扩增到一定治疗量的细胞，且不利于维持其基因组稳定性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术存在的问题，提供一种干细胞制剂及其制备方法。本发明所述干细胞制剂包括脂肪间充质干细胞，来源丰富、体外分化能力强，安全性高、治疗效果好。

为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种干细胞制剂，包括脂肪间充质干细胞。

脂肪间充质干细胞(ADSC)是2002年zuk等人在脂肪组织中分离出来的，具有多向分化潜能的间充质干细胞，其来源丰富、取材方便、细胞获取量大，可称为组织工程理想的种子细胞来源之一。

在一些优选的实施方案中，本发明所述干细胞制剂中所述脂肪间充质干细胞的用量为每10mL所述干细胞制剂含1.0×10⁸个-5.0×10⁸个脂肪间充质干细胞。

在一些实施方案中，本发明所述的干细胞制剂，还包括高浓度血小板血浆。

在一些优选的实施方案中，本发明所述干细胞制剂中所述高浓度血小板血浆的用量为每10mL所述干细胞制剂含1mL-2mL所述高浓度血小板血浆。

在一些实施方案中，本发明所述的干细胞制剂，还包括白蛋白和生理盐水。

在一些优选的实施方案中，本发明所述干细胞制剂中所述白蛋白的用量为每10mL所述干细胞制剂含0.2g-0.4g白蛋白。

在一些实施例中，所述白蛋白为人血清白蛋白。优选为20％人血清白蛋白。所述20％人血清白蛋白的用量为每10mL所述干细胞制剂含1mL-2mL20％人血清白蛋白。

在一些优选的实施方案中，本发明所述干细胞制剂中所述生理盐水的用量为每10mL所述干细胞制剂含5mL-7mL生理盐水。

本发明还提供了所述的干细胞制剂的制备方法，将生理盐水与白蛋白混合后重悬脂肪间充质干细胞，然后与高浓度血小板血浆混匀。

在一些实施方案中，本发明所述的制备方法中所述脂肪间充质干细胞的制备方法为胶原酶I消化50min，加入完全培养基，二氧化碳培养箱中培养，48h后换液，待细胞汇合度达到80％-90％时，传代；取第三代至第五代的脂肪干细胞，胰蛋白酶消化2min，1500rpm离心5min收集细胞。

在一些实施方案中，本发明所述的制备方法中所述高浓度血小板血浆的制备方法为自体全血200g-400g离心5min-10min，取上层血浆1200g-1600g离心5min-10min，取1mL上层血浆，重悬沉淀。