[发明专利]一种木聚糖酶的固定化方法

权利要求书

1.一种木聚糖酶的固定化方法，其特征在于，以细菌纤维素/壳聚糖复合微球为固定化载体，包括固定化载体的制备和固定化木聚糖酶的制备，其中固定化载体的制备包括种子培养、细菌纤维素的制备、细菌纤维素的打浆和细菌纤维素/壳聚糖复合微球的制备；

固定化载体的制备通过以下步骤实现：

（1）种子培养：取活化的木醋杆菌CGMCC No.1.1812斜面种子，接入在HS培养基中，在30℃下，转速为160r/min，振荡培养24h；

（2）细菌纤维素的制备：细菌纤维素为膜式细菌纤维素或絮状细菌纤维素，当细菌纤维素为膜式细菌纤维素，则制备方法为：以2～10%的接种量接入HS发酵培养基中，30℃下培养2～6d，形成细菌纤维素凝胶，用0.1mol/l的NaOH溶液煮沸处理6h，用蒸馏水清洗至细菌纤维素凝胶的pH为7.0，将该细菌纤维素凝胶在105℃下干燥至恒重，得到细菌纤维素干膜；当细菌纤维素为絮状细菌纤维素，则制备方法为：以2～10%的接种量接入HS发酵培养基中，30℃下培养2～6d，形成细菌纤维素凝胶；

（3）细菌纤维素的打浆：当细菌纤维素为膜式细菌纤维素时，将步骤（2）中制备得到的细菌纤维素干膜与4%醋酸溶液置于打浆机中，细菌纤维素干膜的质量与4%醋酸溶液的体积之比为1:40，转速为300～1000r/min，时间5～15min，形成混悬液；当细菌纤维素为絮状细菌纤维素时，将步骤（2）中制备得到的细菌纤维素凝胶浸泡于0.1mol/l的NaOH溶液中，100℃煮沸6h，用蒸馏水或0.1mol/l的醋酸溶液冲洗，至pH值为7.0，将细菌纤维素凝胶与4%醋酸溶液置于打浆机中，其中细菌纤维素湿重与4%醋酸溶液的体积之比为1:4，转速为300～1000r/min，时间5～15min，形成混悬液；

（4）细菌纤维素/壳聚糖复合微球的制备：称取2～4g壳聚糖，加入步骤（3）中制备得到的细菌纤维素混悬液25～100ml，充分溶解得壳聚糖-细菌纤维素混合液，用注射器吸取混合液滴入4mol/L NaOH溶液中，充分反应1 h以上，用PH 值为6.0的Tris-HCl缓冲液洗涤，离心，真空干燥，备用；

固定化木聚糖酶的制备通过以下步骤实现：

（1）称取细菌纤维素/壳聚糖复合微球1～2g，加入0.5%戊二醛10～20ml，缓慢搅拌30分钟，室温下静置12小时，离心去上清液，用pH值为6.0的Tris-HCl缓冲液洗去多余的戊二醛，留沉淀，离心、真空干燥，得含交联醛基的细菌纤维素/壳聚糖复合微球；

（2）称取步骤（1）中得到的含交联醛基的细菌纤维素/壳聚糖复合微球1～2g，加入10～20ml木聚糖酶溶液，搅拌均匀，4℃下交联反应12小时，离心，沉淀，真空干燥，得固定化木聚糖酶。

2.根据权利要求1所述的一种木聚糖酶的固定化方法，其特征在于：固定化载体的制备中的步骤（4）中细菌纤维素/壳聚糖复合微球的制备方法为：称取2～3g壳聚糖，加入步骤（3）中制备得到的细菌纤维素混悬液25～50ml，充分溶解得壳聚糖-细菌纤维素混合液，用注射器吸取混合液滴入4mol/L NaOH溶液中，充分反应6h，用pH 值为6.0的Tris-HCl缓冲液洗涤，离心，真空干燥，备用。

3.根据权利要求2所述的一种木聚糖酶的固定化方法，其特征在于：固定化载体的制备中的步骤（4）中细菌纤维素/壳聚糖复合微球的制备方法为：称取2g壳聚糖，加入步骤（3）中制备得到的细菌纤维素混悬液25ml，充分溶解得壳聚糖-细菌纤维素混合液，用注射器吸取混合液滴入4mol/L NaOH溶液中，充分反应6h，用PH 值为6.0的Tris-HCl缓冲液洗涤，离心，真空干燥，备用。

4.根据权利要求1所述的一种木聚糖酶的固定化方法，其特征在于：固定化木聚糖酶的制备中步骤（2）为：称取步骤（1）中制备得到的含交联醛基的细菌纤维素/壳聚糖复合微球1.5～2g，加入15～20ml木聚糖酶溶液，搅拌均匀，4℃下交联反应12小时，离心，沉淀，真空干燥，得固定化木聚糖酶。

5.根据权利要求1或4任一项权利要求所述的一种木聚糖酶的固定化方法，其特征在于：固定化木聚糖酶的制备中的步骤（2）中所述木聚糖酶的浓度为0.25～2.0mg/ml。

6.一种固定化木聚糖酶，其特征在于以细菌纤维素/壳聚糖复合微球为固定化载体；通过如权利要求 1~5 任一项所述木聚糖酶的固定化方法制备而成。