[发明专利]一种具有抗氧化活性的人参蛋白及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于植物蛋白质分离纯化技术领域，具体涉及一种具有抗氧化活性的人参蛋白制备方法。

背景技术

人参，属五加科人参属，为多年生宿根草本植物，是国内外公认的药用保健珍品，被誉为“百草之王”。作为一味名贵药材，人参在历史悠久的中医学中，有着自己举足轻重的地位。人参中含有多种功效成分，包括人参皂苷、酚酸、多糖、蛋白质、挥发油等。研究表明，人参蛋白具有良好的抗氧化、调节血糖、血脂、抗衰老、提高免疫力的作用。我们在前期研究工作中发现，人参蛋白不但能够提高正常小鼠体内SOD和MDA含量，而且可以提高辐射小鼠体内SOD和MDA含量，具有一定的清除自由基和抗氧化作用，且以对受损机体产生的过量自由基清除效果较明显，可见人参蛋白具有较好的抗氧化作用。近些年，随着人们健康、保健意识的提高，中药保健品及食品市场正在迅速发展。到目前为止，全球中药保健品及食品的销售已超过1000亿美元，并还在以平均每年增长率为百分之二。因此中药保健品及食品存在着巨大的市场开发潜力。而由于社会和科技的发展使得人们的生活节奏越来越快，工作、学习和生活的压力也越来越快，同时吸烟、不良化妆品、环境污染等外源性因素，进而引起人体内过量自由基蓄积，超出人体自身的自由基清除能力，引发衰老、肿瘤、心脑血管、老年性痴呆等疾病。因此，针对于中老年人群，生活节奏快、工作压力大的上班族，学业繁重的学生族及更年期的妇女，开发具有抗氧化功效的保健食品及食品，保持他们的良好精神状态，提高其身体各器官机能，缓解亚健康状态，具有十分广阔的市场前景。

在传统人参加工方式中，人参蛋白一直是被忽略乃至摒弃的成分。因此，一直以来均缺乏适合于工业化生产的人参蛋白大规模制备技术，具有抗氧化活性的人参蛋白制备技术未见报道。现有对植物蛋白提取的方法，主要包括硫酸铵沉淀法、有机试剂提取法、膜过滤法等。硫酸铵沉淀法是最常见的蛋白质提取方法，但它周期长，操作繁琐，需要透析除盐，并且长时间透析对蛋白质构象和活性会产生很多不利影响，不适合大规模生产；有机试剂提取法所用试剂包括丙酮、三氯乙酸等，易引起蛋白质变性，有机试剂成本高、不易去除、安全性差，同样不适合食品和保健品的生产。超滤技术，不需要透析，无毒，生产周期短，提取蛋白质纯度高、活性好，十分适合大规模生产富集高活性中药蛋白质。凝胶层析所选用的载体为惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作简单，条件温和，无需有机溶剂且不影响样品的理化性质。本发明利用超滤技术及凝胶层析建立人参蛋白的制备方法，制备的人参蛋白具有较好的抗氧化活性，并且制备方法简便，适用于工业生产，可用于保健食品及食品开发。

发明内容

本发明的目的是提供了一种具有抗氧化活性的人参蛋白制备方法，其制备步骤如下：

（1）、将新鲜人参清洗后切成小块，按着1:3-1:8的比例加入pH值为7-8的0.01mol/LTris-HCl缓冲液或蒸馏水搅拌均匀后，置于0-10℃环境下每次浸提3-10小时，浸提2-4次，合并浸提后的上清液，即得人参蛋白粗提液。

（2）、上述制备的人参蛋白粗提液经过0.22-0.45μm滤膜过滤澄清后，将其置于截留分子量为5-30KDa的超滤膜装置进行超滤，分离去除小分子化合物。

（3）将超滤浓缩后的浸提液用Sephadex-G75凝胶层析，层析柱规格为16*200mm，上样量为柱体积的5%-20%，流速0.5-1.0cm/min，在280nm紫外吸收下检测出峰并收集、冻干，即得人参蛋白。

附图说明

附图为本发明实施例1-4中制备的人参蛋白SDS-PAGE图谱。

其中：1.蛋白marker、2.实施例1图谱、3.实施例2图谱、4.实施例3图谱、5.实施例4图谱。

具体实施方式

实施例1

（1）、将新鲜人参清洗后切成小块，按着1:8的比例加入pH值为7的0.01mol/LTris-HCl缓冲液搅拌均匀后，置于4℃环境下浸提4小时，浸提2次，合并浸提后的上清液，即得人参蛋白粗提液。

（2）、上述制备的人参蛋白粗提液经过0.22-0.45μm滤膜过滤澄清后，将其置于截留分子量为5-30KDa的超滤膜装置进行超滤，分离杂质及皂苷的小分子化合物。

（3）将超滤浓缩后的浸提液用Sephadex-G75凝胶层析，层析柱规格为16*200mm，上样量为柱体积的5%，流速1.0cm/min，在280nm紫外吸收下检测出峰并收集、冻干，即得人参蛋白。