[发明专利]DEAE-琼脂凝胶微球及其制备方法与应用

权利要求书

1.DEAE-琼脂凝胶微球，其特征在于其化学结构式为：

其中，M代表琼脂糖或者硫琼胶；DEAE中的卤代Cl原子以离子的形式结合在氨基上。

2.如权利要求1所述DEAE-琼脂凝胶微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将琼脂粉加入三口烧瓶，再加入水，加热溶解，得琼脂溶液；另在反应釜中加入环己烷和司班85，将琼脂溶液倒入反应釜，在70℃下搅拌，冷却后取出混合液，放置直到微球沉降，再洗涤，得琼脂凝胶裸球；

2)在三口瓶中加入步骤1)得到的琼脂凝胶裸球和水，加热搅拌下加入环氧氯丙烷，待溶解后，加入NaOH溶液，将水浴温度升至60℃，持续搅拌，冷却至室温后加入水，调pH至5～6，再用水和乙醇交替洗净后，所得的琼脂凝胶微球保存在乙醇中；

3)将步骤2)所得琼脂凝胶微球移入烧瓶中，加入DEAE-HCl，另将NaOH溶液置于烧杯中，密封后预热，再将预热后的烧杯中的NaOH倒入烧瓶中，封口，开动旋转蒸发仪，反应3h以上，再取出烧瓶，用水冷却，得琼脂微球；

4)将步骤3)得到的琼脂微球洗涤，即得到DEAE-琼脂凝胶微球。

3.如权利要求2所述DEAE-琼脂凝胶微球的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述琼脂粉与水的配比为90g∶1500mL；所述加热的温度可为100℃。

4.如权利要求2所述DEAE-琼脂凝胶微球的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述环己烷和司班85的体积比为2.8∶0.75，所述搅拌的条件可在400r/min下搅拌40min后；所述洗涤可采用质量百分浓度为20％的酒精洗涤。

5.如权利要求2所述DEAE-琼脂凝胶微球的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述琼脂凝胶裸球、水、环氧氯丙烷的配比为25g∶35mL∶2mL。

6.如权利要求2所述DEAE-琼脂凝胶微球的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述水采用去离子水；所述加热搅拌的条件可在35℃，200r/min条件下搅拌；所述NaOH溶液的加入量按质量百分比可为环氧氯丙烷的40％，所述加入NaOH溶液的流速可为0.2mL/min；所述持续搅拌的时间可为5h；所述调pH至5～6可采用质量百分浓度为60％的醋酸调pH至5～6；所述再用水和乙醇交替洗净的乙醇可采用质量百分浓度为50％的乙醇；所述琼脂凝胶微球保存在乙醇中的乙醇可采用质量百分浓度为20％的乙醇。

7.如权利要求2所述DEAE-琼脂凝胶微球的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述DEAE-HCl、NaOH溶液、琼脂凝胶微球的体积比为8∶8∶5，所述DEAE-HCl的摩尔浓度可为1.0～4.0mol/L，NaOH溶液的摩尔浓度可为1.0～4.0mol/L；所述预热可采用在水浴锅中预热，预热的温度可为40～80℃，预热的时间可为10min。

8.如权利要求2所述DEAE-琼脂凝胶微球的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述洗涤是将步骤3)得到的琼脂微球在布氏漏斗中用蒸馏水洗涤；所得DEAE-琼脂凝胶微球可用质量浓度为20％的乙醇溶液保存备用或直接用于分离高纯度紫菜R-藻红蛋白和螺旋藻C-藻蓝蛋白。

9.如权利要求1所述DEAE-琼脂凝胶微球在分离高纯度紫菜R-藻红蛋白和螺旋藻C-藻蓝蛋白中应用。

10.如权利要求9所述应用，其特征在于用DEAE-琼脂凝胶微球分离高纯度紫菜R-藻红蛋白和螺旋藻C-藻蓝蛋白的方法，具体步骤如下：

将A565/A280、A620/A280的值为3.0左右的R-藻红蛋白、C-藻蓝蛋白上样于直径φ＝1.0～2.6cm、高度h＝20～70cm的DEAE-琼脂凝胶微球层析柱，以0.3～1.5BV/h的流速、含有0.05～1.0mol/LNaCl的0.05～0.3mol/L磷酸盐缓冲液梯度洗脱，收集各洗脱组分并检测A565/A280、A620/A280的值，得到试剂级纯度的紫菜R-藻红蛋白和螺旋藻C-藻蓝蛋白，冻干保存。